胡晓芳，余永莉，陈 涛，张彬渝，刘茂生，苏丽莉(遵义医学院珠海校区人体解剖与组织胚胎学教研室，广东珠海519041)

    桉叶油是从桉树叶中提取的具有芳香味的挥发性油，具有抗菌、抗氧化、抗炎、促渗透、杀虫、驱蚊、止痒及防腐作用[1]。有文献报道，桉叶油能舒张气管和血管平滑肌、心肌，其作用机制可能是影响膜上离子通道的离子流[2-4]。本课题组前期研究发现，桉叶油对维甲酸(RA)导致胎鼠神经管缺陷有一定的拮抗作用，其机制可能与桉叶油拮抗RA上调胎鼠神经组织的Pax3、Cx43蛋白过度表达有关。本研究利用桉叶油制备含药血清，联合RA作用体外培养神经干细胞，通过检测细胞Pax3、Cx43基因表达水平，从体外实验探讨桉叶油是否也具有拮抗RA上调胎鼠神经组织的Pax3、Cx43蛋白表达的作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 选择SPF级SD大鼠，体重180～220 g[购自广东省医学实验动物中心，实验动物合格证号编号：0094460，许可证号：SCXK(粤)2008-0002]；饲养条件：室温24～27℃，通风，相对湿度68%～80%，每天光照12 h，自由摄食、饮水。

    1.1.2 药品及试剂 RA粉末原料药(北京贝利莱斯生物化学有限公司，批号：110801)，桉叶油[桉叶素99.5%，德信行(珠海)香精香料有限公司，批号：110626]；选用金龙鱼花生油作为药品溶剂。

    1.2 方法

    1.2.1 桉叶油含药血清的制备 选择体重250～300 g清洁级的雄性SD大鼠，将其随机分为6组，每组3只，分别作为正常血清组(大鼠自由饮食)、溶剂血清对照组(每只大鼠早晨灌胃花生油3 mL，每天1次，连续灌胃 7 d)、桉叶油血清组(分别用桉叶油 300、1 000、1 500 mg∕kg 于早晨灌胃，每天 1 次，连续灌胃 7 d)。各组末次灌胃后2.5 h左右，用10%的水合氯醛进行麻醉，解剖胸腔，用一次性无菌注射器心脏采血，离心，收集血清。无菌滤器过滤除菌，置于56℃水浴30 min灭活，-20℃保存备用。

    1.2.2 神经干细胞培养及鉴定 在无菌条件下取24 h内新生SD大鼠的海马组织，轻微机械吹打组织，用200目过滤网过滤、收集单细胞悬液。加入适量DMEM∕F12 全培养液[内含 2% 维生素 B27、20 μg∕L 成纤维细胞生长因子(FGF)和 20 μg∕L 表皮生长因子(EGF)]，放入37℃、5%CO2饱和湿度CO2培养箱中换液培养7 d ......