魏江，于洋，罗光华，张俊，徐宁，张晓膺(.苏州大学附属第三医院综合实验室，江苏常州3003；.瑞典Lund大学临床化学系S-85)

    载脂蛋白M(ApoM)主要存在于高密度脂蛋白(HDL)中，少部分存在于低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白中[1]。其有8股反向β折叠片段，从而形成疏水性结合域，这样就与一些亲脂小蛋白分子结合，如视黄醇、肉豆蔻酸及1-磷酸鞘氨醇(S1P)，从而发挥相应作用。ApoM能促进前β-HDL颗粒形成及成熟，而β-HDL的主要功能是促进细胞内胆固醇的外流，从而发挥其抗动脉粥样硬化功能[2]。ApoM是S1P的主要载体，并调节S1P的代谢，维持机体内皮细胞结构和功能的完整性[3]。ApoM与S1P结合具有抗炎作用[4]。加入外源性的ApoM-S1P抑制肿瘤坏死因子-α的诱导内皮细胞炎症作用[5]。作者前期研究发现，雌激素能体内外上调ApoM的表达，但具体机制尚不清楚[6]。本研究将进一步探讨雌激素调节ApoM基因转录的具体分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 HepG2肝癌细胞株和人乳腺癌细胞系(MCF-7)购自美国ATCC公司；DMEM培养基、无酚红DMEM培养基、RPMI-1640培养基、胎牛血清、活性炭处理的胎牛血清和LipofectamineTM2000转染试剂购自美国Gibco公司；雌二醇和牛血清清蛋白结合雌激素(E2-BSA)购自美国 Sigma公司；雌激素受体α(ER-α)拮抗剂MPP购自英国Tocris公司。质粒pGL3-basic和双荧光报告系统购自美国Promega公司；Gel Extraction Kit试剂盒和质粒提取试剂盒购自美国OMEGA公司的；LightShift?Chemiluminescent凝胶电泳迁移实验(EMSA)试剂盒购自美国Pierce公司；染色质免疫共沉淀(CHIP)试剂盒购自美国Thermofisher公司。总RNA提取试剂盒K352购自上海申能博彩科技有限公司。首链cDNA合成试剂盒购自立陶宛Ferments公司。引物及探针均由上海生工生物工程有限公司合成。兔抗人ApoM多克隆抗体由瑞典隆德大学临床化学系制备。抗人单克隆抗体和辣根标记羊抗兔免疫球蛋白(IgG)二抗购自美国Santa Cruz公司。ECL化学发光检测试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司。总蛋白提取试剂盒购自上海炎彬化工科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 细胞培养按常规培养HepG2细胞，用含10%活性炭处理的胎牛血清的无酚红DMEM稀释消化后离心的细胞 ......