夏 宁，颜如玉，廖晓辉，张 玲△(重庆医科大学附属第二医院：.风湿免疫科；.肾内科，重庆40000)

    肝再生增强因子(ALR)是一种能促进肝脏再生、具有热稳定性和非特异性的生长因子，在肝脏、睾丸及肾脏中均有表达，并能自分泌到细胞外[1]。ALR有3种亚型，其中15 kDa ALR亚型主要存在于核内及胞质内[2-3]，21 kDa及23 kDa ALR亚型则主要定位于线粒体内膜系统，参与铁(Fe)和硫(S)离子的转运，维持铁硫蛋白(Fe/S蛋白)的生物活性及细胞Fe离子内稳态[4-5]。笔者所在课题组既往研究发现ALR在肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤过程中具有抗凋亡作用，并且证实ALR通过减轻线粒体氧化应激损伤，发挥保护作用[6-7]。缺氧所造成的线粒体氧化损伤可导致肾小管功能受损，引起大量致纤维化因子的产生，并经多途径引起肾间质纤维化(RIF)[8]。因此，ALR有可能通过线粒体途径参与慢性肾小管间质损伤的病理生理过程及RIF进展过程。本实验拟通过转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)上皮-间质转化(EMT)模型及单侧输尿管梗阻术(UUO)大鼠模型，通过分析细胞及组织中内源性ALR表达水平的变化，验证前述猜想，并为进一步研究奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料 HK-2细胞购自美国模式培养物集存库(ATCC)，兔抗人ALR多抗体、兔抗大鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体购自德国Santacruz公司，兔抗人钙黏附蛋白 E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)单克隆抗体购自英国Abcam，高纯度总RNA提取试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司，RNA逆转录试剂盒、重组人TGF-β1购自美国R&D Systems公司，实时定量聚合酶链反应(PCR)试剂盒、异硫氰酸荧光素(FITC)标记羊抗兔IgG抗体购自中杉金桥公司，PCR扩增上、下游引物由华大基因公司合成。雄性SD大鼠20只，购自重庆医科大学实验动物中心，体重250～300 g。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及处理 HK-2细胞以含10%胎牛血清(FBS)的1640培养液37℃、5%CO2条件下贴壁培养 ......