易 倩,张合富,李官翔,樊丽莎,邓加加,张伶燕,张 健

    (1.贵州中医药大学药学院,贵州 贵阳 520025;2.贵州中医药大学实验动物研究所,贵州 贵阳 520025)

    骨骼作为维持机体运动的重要器官,在体内发挥着运动、支持、保护、造血、贮存矿物质等功能。正常情况下,机体内成骨细胞介导的骨形成能与破骨细胞介导的骨吸收保持动态平衡,维持骨骼的正常功能[1]。中老年人,尤其是绝经后的妇女,其破骨细胞过度激活、骨吸收增加,使得骨量降低、骨骼脆性增加,在微观结构上呈现疏松多孔状态,即骨质疏松症。因此,抑制破骨细胞分化成为防治骨量丢失、治疗骨质疏松症的重要靶点。麦冬是我国使用广泛的传统中药。据张锡纯《医学衷中参西录》中记载,麦冬具有养阴润肺、益胃生津、清心除烦等功效。麦冬多糖(OPS)是麦冬的主要成分,在麦冬中的提取率高达35%,这可能与麦冬的功效有关[2]。近期研究发现,OPS的作用更加广泛,具有抗炎、抗氧化、抗衰老、降血糖、保护心肌、提高机体免疫力等多种功效[2-7]。研究发现,OPS通过降低氧化应激对巨噬细胞的损伤,减少细胞凋亡,从而起到保护巨噬细胞的作用[8],但其在骨代谢领域的功能尚未揭示。破骨细胞起源于骨髓单核巨噬细胞(BMMs),是体内唯一具有骨吸收能力的终末分化细胞。本研究探讨了OPS对核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导的BMMs破骨分化、骨吸收的影响及潜在机制。

    1 材料与方法

    1.1实验动物 6～8周SPF级C57BL/6j雌性小鼠10只,体重18～22 g,购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司[SCXK(湘)2022-0011],饲养于贵州中医药大学实验动物研究所动物房[SYXK(黔)2021-0005],温度20～25 ℃,湿度40%～60%,自由采食及饮水,相关饲养及实验操作经贵州中医药大学实验动物伦理委员会批准(20220131)。麦冬购于张家港市绿色中药饮片有限公司(批号：190115)。

    1.2主要试剂与仪器 α-MEM培养基、胎牛血清(美国Gibco公司),M-CSF、RANKL(美国Peprotech公司)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色试剂盒(美国Sigma公司),TRAP活性检测试剂盒、细胞活性试剂盒、青-链霉素双抗、RNAeasyTM动物RNA抽提试剂盒、BeyoRTTMⅢ cDNA合成试剂盒、BeyoFastTMSYBR Green定量聚合酶链式反应(PCR)试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)。多功能酶标仪(上海闪谱生物科技有限公司),相差显微镜(日本Olympus公司),T100TMPCP仪(美国Bio-Rad公司),实时荧光定量PCR仪(杭州博日科技有限公司),NanoDrop微量分光光度计(美国Thermo Fisher公司) ......