HPLC法测定康妇炎片中芍药苷的含量
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【摘要】目的:建立康妇炎片中芍药苷含量测定的方法。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),以kromasil C18柱(φ4.6 mm×250 mm,5 mm)为色谱柱;以乙腈-水(17:83)为流动相; 流速:1.0 ml/min; 检测波长:230 nm。结果:芍药苷在0.1006-2.0120 mg范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999,芍药苷的平均回收率为101.09 %,RSD = 1.47%。结论:所建立的方法能准确、简便地进行定量检测,可用于康妇炎片的质量控制。
【关键词】康妇炎片;芍药苷;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法
【中图分类号】R927.11
【文献标识码】A 【文章编号】1009-6019(2009)-05-0090-2
康妇炎片由赤芍、蒲公英、败酱草、薏苡仁等十一味中药组成,由康妇炎胶囊(收载于《国家中成药标准汇编外科妇科册》)改变剂型而成,具有清热解毒,化瘀行滞之功,临床上广泛用于治疗月经不调、痛经、附件炎、阴道炎、子宫内膜炎及盆腔炎等。药理学研究表明[1],芍药苷为赤芍中主要活性成分,本文选择芍药苷作为本品含量测定的指标成分[2],建立了康妇炎片的含量测定方法。
1 实验材料
1.1 仪器
LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津公司);SPD-10A紫外检测器(日本岛津公司); Kromasil C18柱(φ4.6mm×250mm,5mm);AEL-200型精密分析天平(日本岛津公司)。
1.2 试药
芍药苷对照品:由中国药品生物制品检定所提供(批号:110736-200321,供含量测定用)。乙腈为色谱纯,甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其余试剂为分析纯。
2 实验方法
2.1 色谱条件 色谱柱:kromasil C18柱(φ4.6mm×250mm,5mm);流动相:乙腈-水(17:83); 流速:1.0ml/min; 检测波长:230nm; 柱温:室温; 进样量:10ml。理论塔板数按芍药苷计算应不低于3000。此条件下的色谱图见图1。
2.2 线性关系考察 精密称取芍药苷对照品10.06mg,置50ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备溶液(浓度为0.2012mg/ml),精密量取上述对照品溶液0.5、1、3、5、10ml,分别置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。按拟定的色谱条件分别进样10ml测定。以芍药苷对照品的进样量(mg)为横坐标(X),峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线,得回归方程为:Y=1572171X+8866.8 (r=0.9999)
2.3 精密度试验 精密称取样品0.5g,按照“2.8 样品测定”项下的方法提取供试品溶液,对同一供试品溶液连续进样5次,结果5次测定峰面积的RSD为0.18%。
2.4 稳定性试验 取“2.3项”下的供试品溶液,分别于0,1,2,4,8,12,24 h测定,结果7次测定结果的RSD为0.62%。
2.5重复性试验 对同一批号的样品平行称取6份,按照“2.8 样品测定”项下的方法制备供试品溶液,测定,结果6份样品的平均含量为2.010 mg/g ,RSD =1.21%。
2.6 加样回收率测定 精密称取芍药苷对照品5.2mg置250ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液(浓度为20.8mg /ml)。精密称取“2.5项”下的康妇炎片样品(芍药苷含量为2.010mg/g)约0.25g,平行取6份样, 分别精密加入上述芍药苷对照品溶液25ml,按“2.8项”下的方法提取、测定,计算回收率,结果平均回收率为101.09%,RSD =1.47%(n=6)。详见表1。
2.7 阴性干扰试验
按样品工艺制备方法同法制备缺赤芍的阴性对照样品,按“2.8项”下的方法提取,测定。结果阴性对照样品在芍药苷出峰位置无吸收峰。见图1。
2.8 样品测定
取本品20片,除去包衣,精密称定,研细,取约0.5g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。按上述色谱条件,测定了康妇炎片3批样品中芍药苷的含量,结果分别为0.52mg/片、0.64mg/片、0.54mg/片,平均含量为0.55mg/片。
3 讨论
3.1 流动相的选择[3]:曾先后采用甲醇-水(30:70)、甲醇-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1%磷酸(14:86)、乙腈-0.4%冰醋酸(15:85)、乙腈-水-磷酸(15:85:1)、乙腈-水(17:83)等流动相进行了试验,结果以乙腈-水(17:83)作为流动相时芍药苷与相邻峰可达到基线分离,故选择乙腈-水(17:83)作为流动相。
3.2 样品提取方法及提取时间的选择[4]:以为溶剂,比较加热回流及超声提取这两种方法,结果二者均能将芍药苷提取完全,但超声提取较为简便,易于操作,故选用超声提取的方法进行提取。
3.5 本品为含药味较多,采用HPLC法测定本品中的芍药苷,方法简单可行,重现性好,阴性无干扰,可用于本品的质量控制。
参考文献:
[1]马民. 芍药除血痹的功效与应用 [J].时珍国医国药,2005,16(4):291-292.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S] .北京:化学工业出版社,2005:109.
[3]蒋爱波,孙代华,刘焱文. 高效液相色谱法测定康妇炎颗粒中芍药苷的含量 [J].湖北中医杂志,2006,28(9):53-54.
[4]谢晓梅,廖自荣.芍药中芍药苷提取方法的比较研究[J].中国中医药科技,2005,12(2):98-99.
作者简介:程晓华,(1981年-),男,广西药科学校教师。, 百拇医药