大肠杆菌谷氨酸脱羧酶A的基因克隆与表达及其酶学性质
氨基丁酸,1材料与方法,1材料与试剂,2仪器与设备,3培养基,4牛血清白蛋白标准溶液及缓冲液,5试验方法,6分析方法,7数据处理和统计分析,2结果与分析,1L-谷氨酸钠,γ-氨基丁酸和蛋白质质量浓度标准曲线
于 平,刘 航,朱鹏志,胡淳玉,杨柳贞,贺 敏,马 健(浙江工商大学食品与生物工程学院 杭州 310018)
γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA)是一种非蛋白质氨基酸[1],最初是在马铃薯块茎组织中发现的[2]。在微生物中,γ-氨基丁酸参与了芽胞杆菌的孢子萌发过程[3-5]。大肠杆菌、乳酸菌、单增李斯特菌和分枝杆菌等部分细菌还可利用γ-氨基丁酸来抵抗酸性环境[6-8]。
目前,γ-氨基丁酸作为一种生物活性因子广泛应用于食品和制药工业中。它可以作为一种功能因子添加到食品中,如奶酪、茶和面包的制作过程中经常添加γ-氨基丁酸[9-11]。在制药工业中,γ-氨基丁酸作为哺乳动物中枢神经系统的主要抑制性神经递质,可改善大脑内血浆和生长激素的浓度以及蛋白质的合成[12]。口服γ-氨基丁酸还能显著降低血压和治疗神系统经障碍[13]。Hagiwara 等[14]的报道称γ-氨基丁酸作为胰岛素的强分泌剂,可有效预防糖尿病。γ-氨基丁酸的摄入也可以调节疼痛和焦虑以及血清和脂质水平[15-16],抑制癌细胞增殖[17],提高记忆力和学习能力[16]。
由于γ-氨基丁酸的诸多有益功能和日益增长的商业需求,越来越多的学者尝试通过化学或生物法制备γ-氨基丁酸[17-19]。由于生物法具有反应过程简单、催化效率高、反应条件温和和环境相容性好等优点,目前已成为制备γ-氨基丁酸的主要方法[20]。γ-氨基丁酸可由谷氨酸脱羧酶(GAD)催化谷氨酸脱羧制备(图1)[1,21],因此研制高校廉价的谷氨酸脱羧酶是生物法制备γ-氨基丁酸的关键。
图1 L-谷氨酸脱羧制备γ-氨基丁酸Fig.1 Preparation of γ-aminobutyric acid by L-glutamate decarboxylation
谷氨酸脱羧酶能催化谷氨酸和谷氨酸盐的α-脱羧反应合成γ-氨基丁酸[1]。它是一种磷酸吡哆醛依赖型酶,包括谷氨酸脱羧酶A(GadA)和B(GadB)2 个亚基[3]。据报道,谷氨酸脱羧酶广泛存在于哺乳动物的大脑、植物和微生物中[22]。来源不同的谷氨酸脱羧酶,在酶学性质上存在一定的差异。目前许多学者已经从植物[23]、大肠杆菌[24]、曲霉[25]和乳酸菌[26]中成功分离了谷氨酸脱羧酶 ......
您现在查看是摘要页,全文长 18592 字符。