基于NE-4C细胞模型制备猪脑促增殖肽
多肽,水解,1材料与方法,1材料与试剂,2主要仪器与设备,3试验方法,2结果与分析,1猪脑促增殖肽制备酶的筛选,2猪脑酶解物中多肽分子质量分布,3各因素对促增殖活性的影响,4猪脑多肽制备的最适条件,3结论
谌 迪,肖朝耿*,卢文静,叶 沁,唐宏刚,张 怡,张治国,周天琼(1 浙江省农业科学院食品科学研究所 杭州 310021 2 上海市农业科学院农产品保鲜加工研究中心 上海 201403 3 杭州华津药业股份有限公司 杭州 311241)
猪脑鲜嫩可口,富含蛋白质、脑磷脂和各种矿物质,可増加机体的免疫力,是传统的健脑食品[1]。Sharma 等[2]发现猪脑水解产物多肽可以减缓脑水肿,抑制神经元损伤。林元藻等[3]发现猪脑水解物可显著增强小鼠的学习记忆能力。研究表明,猪脑多肽对大脑的改善作用可能与其NSC-34 细胞的神经保护作用有关,然而过高浓度的猪脑多肽会抑制细胞的增殖[4]。临床上,Ziganshina 等[5]发现猪脑多肽可以改善急性缺血性脑卒中患者的症状并延缓病情进展,其水解物还可用于治疗神经系统疾病并预防年龄依赖性痴呆[6-8]。Guekht 等[9]将猪脑多肽水解物用于治疗认知能力逐渐丧失的血管型失智。猪脑多肽水解物可以通过提高脑组织无氧代谢的ATP 生成量、减少氧自由基生成等作用机制促进脑代谢,增加脑活性[10]。临床上采用猪脑水解物治疗脑功能障碍疾病已有数十年,早在上世纪我国就已开发出中药制剂用于治疗头痛,如镇脑宁就是以猪脑为原料开发而成,采用乳猪制备的脑活性多肽与价格昂贵的进口脑活素具有类似作用[11]。脑活素已在临床上广泛应用40 多年,已知脑活素是75%游离氨基酸和25%短链肽的混合物,短肽可能是其生理活性成分[12]。综上,猪脑多肽具有重要的药学价值。
与酸碱水解等方法相比,生物酶解法制备多肽具有专一性强,反应条件温和,反应过程容易控制,对环境友好,无毒性物质产生等优点[13-15]。采用酶解制备的生物活性肽具有抗氧化、抗菌、免疫调节等多种功能[16-19]。猪脑酶解产物已被用于治疗脑功能障碍疾病,如奥地利生产的脑活素(Cerebrolyzin),日本生产的Ceremon 及德国、罗马尼亚生产的Crelizin 都是通过酶水解脑蛋白获得的制剂。猪脑多肽可保护神经元防止大脑损伤,还能预防炎症,抑制细胞凋亡[20]。猪脑多肽水解物中的活性短肽与内源神经营养因子有类似的作用[21]。基于促增殖活性优化猪脑多肽的提取制备技术很有必要。
本文以猪脑蛋白为材料,通过胃蛋白酶、胰蛋白酶和脂肪酶等制备猪脑促增殖肽,采用色谱法比较猪脑酶解液中多肽分子质量的分布 ......
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