高娟娟，贾丽艳*，畅盼盼，田宇敏，甄晓君，王恬恬

    (1 山西农业大学食品科学与工程学院 山西太谷 030801 2 山西省白酒生物工程研究生教育创新中心 山西太谷 030801)

    在食品加工、运输、贮藏过程中经常会受到微生物的污染，使食品腐烂变质，造成巨大的经济损失[1]。目前，防止食品的腐败变质常用的方法是添加化学防腐剂[2]，然而，使用化学防腐剂存在影响人类健康的隐患。开发绿色、安全、高效的天然防腐剂成为人们关注的热点[3]。近年来，细菌素作为绿色生物防腐剂的研究较多[4-5]，特别是对乳酸菌所产细菌素的理论和应用研究。然而，乳酸菌产细菌素的抑菌谱较窄，主要是抑制革兰氏阳性菌，这限制了其的广泛应用[6]。为此，开发广谱细菌素成为亟待解决的问题。

    枯草芽孢杆菌细菌素A32(简称细菌素A32)是本课题组由从山西老陈醋新鲜醋醅中分离筛选的枯草芽孢杆菌HJD.A32 发酵产生的抑菌蛋白[7-8]，可通过酸沉淀法获得[9]。细菌素A32 具有广谱的抑菌性，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有抑制作用，对温度、pH 值、表面活性剂等均具有一定的耐受性，对胰蛋白酶、胃蛋白酶等具有敏感性[8]，具有一定的食用安全性，对人体不会造成危害，适合应用于不同食品加工中。研究细菌素A32的抑菌机理，可为该细菌素作为绿色生物防腐剂的开发利用提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 菌株、材料及试剂

    枯草芽孢杆菌HJD.A32(Bacillus subtilis)，分离自山西老陈醋新鲜醋醅，保藏于中科院微生物菌种保藏中心，编号为CGMCC6624；大肠杆菌(Escherichia coli)CGMCC44102、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CGMCC26003，中国普通微生物菌种保藏管理中心。发酵液培养基[10]：葡萄糖1 g，酵母浸膏1 g，蒸馏水100 mL。牛肉膏蛋白胨培养基[11]：牛肉膏0.5 g，蛋白胨1 g，NaCl 0.5 g，琼脂2 g，蒸馏水100 mL，pH 7.2～7.4。牛肉膏蛋白胨液体培养基[11]：牛肉膏0.5 g，蛋白胨1 g，NaCl 0.5 g，蒸馏水100 mL，pH 7.2～7.4。

    过氧化氢酶，北京solarbio 公司；碱式磷酸酶，南京建成生物工程研究所；其它试剂均为分析纯级。

    1.2 仪器与设备

    Centrifuge5417 R 高速冷冻离心机、Centrifuge5804 R 高速冷冻离心机 ......