李 娜，马玉洁，刘 楠，王珊珊，周德庆

    (中国水产科学研究院黄海水产研究所 山东青岛 266071)

    鱼鳔，又名花胶或鱼肚，以其胶原蛋白含量极高而著称，自古以来因各种功效显著而受到颇多消费者的喜爱[1-2]。相关研究报道，通过酶解鱼鳔制备的多肽具有较高的抗氧化活性[3-4]。对氧化与衰老的关系，有研究表明，提高机体抗氧化能力是延缓衰老的最佳途径之一[5]。与传统抗氧化剂相比，来自海洋生物的新型肽，因具有高抗氧化活性，更好的生物相容性和更低的毒性而受到越来越多的关注[6-7]。对多肽与延缓机体衰老的关系探讨成为近年的研究热点。

    生物体的衰老发生在机体的每一个层面，包括从细胞、组织到器官。细胞是生命的基本组成单位，细胞衰老被认为是人类衰老的基础。细胞衰老分为早期衰老与复制性衰老两种。复制性衰老即细胞复制过程中会产生端粒缩短的现象，最终导致细胞分裂能力减弱。早期衰老是当细胞遭受外界干扰发生永久不可逆的增殖停滞现象。在衰老相关模型的研究中，人胚肺二倍体成纤维细胞往往被选为模式细胞种类，而且通过H2O2诱导细胞建立早期衰老细胞模型更易于体外模拟衰老进程的研究[8-9]。本研究通过建立H2O2诱导的2BS 细胞早期衰老细胞模型，检测细胞的增殖率、细胞凋亡情况与β-半乳糖苷酶含量等衰老相关指标，探讨鳕鱼鳔胶原肽对早熟性细胞衰老进程的影响。同时检测ROS 活性氧水平与抗氧化酶含量等，探讨其可能通过对抗氧化系统的保护作用实现对细胞早期衰老进程的干预作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器

    鳕鱼鳔(冻鲜品)，平均质量10.44 g/只，由青岛海洋兄弟食品有限公司提供。人胚胎肺二倍体成纤维细胞(2BS 细胞)，江苏凯基生物科技股份有限公司。

    复合蛋白酶、ROS 活性氧试剂盒、Hoechst 染色试剂盒、β-半乳糖苷酶试剂盒，北京索莱宝科技有限公司；SOD、CAT、MDA 试剂盒，南京建成生物公司。

    可见分光光度计，上海元析仪器有限公司；pH计，梅特勒-托利多(上海)有限公司；倒置显微镜，日本Nikon 公司；智能活细胞成像分析系统，美国伯腾仪器有限公司。

    1.2 试验方法

    1.2.1 鳕鱼鳔胶原肽的制备 将鳕鱼鳔原料解冻后洗净，剪成0.5 cm×0.5 cm 的小块，加入10 倍体积0.1 mol/L 的氢氧化钠溶液，于4 ℃条件下搅拌溶胀48 h 后，除去非胶原成分的杂蛋白。洗净后加入10 倍体积蒸馏水匀浆，将pH 值调至中性，按100 U/mL 比例加入复合蛋白酶 ......