王忠合，胡文梅，卢燎源，李伟斌，李晓婷，吴家俊，王 军

    (韩山师范学院生命科学与食品工程学院 广东 潮州 521041)

    基于三重四极杆的选择反应监测(Selective reaction monitoring，SRM)也称为多反应监测(Multiple reaction monitoring，MRM)是质谱定量的“金标准”，在蛋白质定量中广泛使用，而根据专一性肽段的母离子质量和子离子质量，最大程度地去除干扰离子，监测母离子与子离子形成的离子对信号响应，是目标蛋白验证和绝对定量的有效手段[1-2]。然而，随着定量蛋白质组学的深入发展，样本基质越来越复杂，目标蛋白丰度越来越低，容易受到高丰度蛋白的掩盖，而SRM 由于质量分辨率低，难以有效去除复杂基质背景的干扰，易造成假阳性结果。同时，随着分析通量的要求越来越高，一次分析可能需要监测成千上万个离子对，而由于SRM 灵敏度的局限，使得同时监测的离子对数量有限；此外，离子对、碰撞能量等条件的优化也费时、费力，难以满足目标蛋白质组学高通量发展的需要[3]。四极杆-高分辨串联质谱技术(如QTOF、QOrbitrap) 的发展以及扫描速度的提升，为目标蛋白定量提供了新的途径。数据依赖型采集(Data dependent acquisition，DDA)方式是一种随机选取丰度最高的前几名离子进行二级碎裂检测，在非标记蛋白质组学领域具有非常突出的优势，主要用于过敏原检测[1，4]、蛋白功能分析[5]、生物标志物和差异蛋白鉴别等[6-7]。基于DDA 策略的非标记蛋白质组学定量方法主要有两种：一种是信号强度法，即利用提取一级谱图峰面积或峰强度进行定量；另一种是谱图计数法，即通过统计同一蛋白质所有肽段二级谱图总数来确定蛋白质的相对含量，丰度越高的蛋白质肽段，被检测到的次数越多，其得到的二级谱图张数越多；前者基于一级峰面积或峰强度定量存在共流出肽段干扰定量而影响准确性的问题，后者基于二级谱图张数定量法则存在低丰度蛋白被掩盖而无法定量的情况。

    定量蛋白质组学以定性和定量样本中所有蛋白质为目标，可分为标记定量和非标记定量，常用的标记方法为同位素标记试剂法。其中，同位素标记法准确度高，而试剂价格昂贵且可标记的样本数量有限；非标记定量技术无需昂贵的同位素试剂，耗费低，对样品酶解产物直接进行质谱分析，使其最接近原始状态，能够更好地反映出样品中蛋白质的差异性[8]。近年来，肉类掺假事件层出不穷，随着肉类价格差异不断扩大，不法商家为了追求利益，借机用价格低廉的鸡肉、马肉、鸭肉等伪制牛羊肉制品，使得消费者对肉类及其制品的食品安全问题甚为担忧 ......