大菱鲆源荧光假单胞菌群体感应淬灭酶基因的克隆及生物信息学分析
结构域,位点,1材料与方法,1菌株来源,2主要试剂和仪器,3试验方法,4pf-1240基因序列生物信息学分析,2结果与分析,1荧光假单胞菌PF08的pf-1240基因PCR扩增,2测序结果及序列比对
申 悦,崔方超*,李婷婷,王当丰,刘景云,谭茜倩,吕欣然,励建荣(1 渤海大学食品科学与工程学院 生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心 辽宁锦州 121013 2 大连民族大学生命科学学院 辽宁大连 116600)
群体感应是细菌间进行信息交流的一种方式,通过分泌信号分子来达到交流的目的,从而调控相应功能基因的表达,使细菌表现出一些表型特征,如毒力因子的分泌、生物被膜的形成、细菌运动性和扩散性的增强等[1]。这些行为一方面能够增强细菌自身的防御能力,提高生存能力,另一方面会导致一些病原菌毒力因子和致病基因的表达[2]。群体感应系统存在于许多水产腐败菌中,能够参与并调控水产品的腐败进程,如胞外蛋白酶的产生、生物被膜的形成、黏液的分泌等,对水产品的品质产生严重的影响。温和气单胞菌是鱼类等水产品低温贮藏过程中常见的腐败菌之一,能够产生AHLs 来调控其生物被膜的产生,蛋白酶的表达和群集泳动[3]。大量化学保鲜剂的使用使细菌出现耐药性,增加了水产品食用的危险。寻找安全的群体感应抑制剂(Quorum sensing inhibitors,QSIs)来干扰或破坏其参与调控的生物学功能,可在非致死条件下阻断依赖QS 的细菌侵染,并抑制相关致腐因子的分泌,从而为解决细菌耐药性,控制水产品品质变化,延长水产品的货架期提供新的途径[4]。
群体感应淬灭(Quorum quenching,QQ)通过抑制信号分子的合成和积累,或对信号分子进行降解和修饰,以此破坏细菌群体感应系统,从而阻断腐败菌或致病菌带来的不利影响[5]。群体感应淬灭酶(Quorum quenching enzymes)能利用群体感应中的信号分子AHLs 作为底物,通过酶促反应使AHLs 分解[6]。根据淬灭酶催化机制的不同,可分为内酯酶、酰化酶和氧化还原酶。内酯酶水解AHLs 内酯环的酯键,酰化酶水解酰基骨架,氧化还原酶可以催化氧化或还原AHLs。其中AHL 酰化酶能以不可逆的方式破坏高丝氨酸内酯部分和酰基链之间的酰胺键,释放出游离高丝氨酸内酯(HSL)和相应的脂肪酸[7]。AHL 酰化酶广泛存在于各种细菌中,包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌,如铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)、Anabaena sp.PCC7120和青枯菌(Ralstonia solanacearum),然而其底物特异性因AHL 的不同酰基链取代而不同。据报道铜绿假单胞菌PAO1中存在2 种酰基转移酶PvdQ 和QuiP,两者都可以编码AHL 酰化酶,并降解3O-oxo-C12-HSL[8] ......
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