越橘花青素脂质体对Caco-2 细胞的抗氧化作用
1材料与方法,1材料与试剂,2仪器与设备,3方法,4数据处理与与分析,2结果与分析,1脂质体的表征,2脂质体的稳定性,3越橘花青素脂质体对Caco-2细胞的毒性情况,4越橘花青素脂质体对细胞氧化应激的保护作用
陈玉洁,关荣发,黄海智,钟 浩,孙玉敬,张 维(1 中国计量大学生命科学学院 杭州 310018 2 浙江工业大学食品科学与工程学院 杭州 310014)
正常生理条件下,体内的自由基维持在正常生理范围内,然而,外界因素的刺激会导致机体内氧化与抗氧化反应不均衡,当体内产生过量自由基时,会损害细胞和组织[1-2],造成细胞内脂质、代谢酶类及功能蛋白等物质活性的丧失[3],炎性细胞浸润,产生炎症[4]。肠上皮细胞因氧化应激而产生的氧化损伤,会引起肠道屏障功能丧失[5]。自由基使机体的性能下降,增加各种疾病的发病率,包括癌症、心血管疾病和神经系统疾病,被认为是导致机体衰老的一个重要因素[6]。安全有效的天然抗氧化剂受到越来越多的关注。
花青素是一种天然的水溶性类黄酮化合物,在许多植物的根以及谷物中广泛存在[7-8]。花青素具有清除自由基、抗氧化、抗炎症、抗肿瘤及预防心血管疾病等多种生物活性[9-12]。然而,花青素存在稳定性较低,易降解的问题,容易受到如温度、酶光等外界因素的影响而发生降解[13-16],其应用受限制。研究表明[17-18],脂质体在改善包装材料的生物稳定性、吸收和生物利用度方面比传统配方有优势。脂质体是一种人工磷脂双层膜,具有类似细胞膜的结构,携带疏水和亲水化合物,作为物理化学屏障,增加亲脂化合物在水中的溶解度[19-22]。利用脂质体作为载体,可以提高包材的溶出率和靶向性,提高脂质体的缓释效果,有效延缓包材的释放。
本试验以脂质体作为载体制备越橘花青素脂质体,用过氧化氢处理人结肠癌上皮细胞Caco-2细胞,制备细胞氧化损伤模型,研究越橘花青素脂质体对细胞氧化损伤的保护作用。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
越橘花青素(≥25%),陕西清雅生物科技有限公司;人结直肠腺癌细胞Caco-2、MEM 培养基、庆大霉素-两性霉素B 混合溶液,上海启达生物科技有限公司;卵磷脂、胆固醇、DMSO、胰蛋白酶、磷酸盐缓冲溶液PBS、试剂盒,北京索莱宝科技有限公司;胎牛血清,上海双洳生物科技有限公司;其它试剂为分析纯级。
1.2 仪器与设备
UV-1200 紫外分光光度计,上海美普达仪器有限公司;RV10 旋转蒸发仪,德国IKA 公司;GENIOS-BASIC 型CO2培养箱,美国赛默飞世尔科技公司;Nano-ZS90 马尔文粒径仪,英国Malvern公司;JEM-2100 透射电子显微镜,日本株式会社;TC20 全自动细胞计数仪 ......
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