纪晨雪，牛永武，许艳华，孙艺铭，杨岩晓，赵仁勇

    (河南工业大学粮油食品学院 郑州 450000)

    脂肪酶(Triacylglycerol acylhydrolases，EC 3.1.1.3)属于羧基酯水解酶类，作用于酰基甘油的羧酸酯键，可以水解甘油三酯生成脂肪酸和甘油[1-2]，广泛应用于食品、化工、医药、皮革等领域。大量研究表明，脂肪酶广泛存在于动物、植物和微生物组织中。与动植物合成脂肪酶相比，微生物合成脂肪酶具有种类丰富，生产成本低，温度和pH 值适应范围广，稳定性高，底物选择性强，有机溶剂耐受度好等优良特点[3]。同时，生产脂肪酶的微生物具有繁殖快、生长周期短且不受季节影响等优点，适合用于工业化生产[4-7]。微生物生产脂肪酶已成为当前市售脂肪酶的主要来源。为满足脂肪酶应用领域的多种消费需求，研究人员主要围绕脂肪酶菌株的挖掘、产酶条件优化、菌株基因改造等方面展开研究。卢鑫[8]将米根霉脂肪酶基因在毕赤酵母中进行表达，添加共表达伴侣蛋白，结果脂肪酶活提高了1.7 倍。钱忠英等[9]利用同源重组方式将疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因整合到毕赤酵母中，筛选并纯化得到一个具有高拷贝数转化子的菌株。李牧[10]将嗜麦芽糖寡养单胞菌脂肪酶基因在重组大肠杆菌中进行表达，脂肪酶活较野生菌株提高了3.3 倍。景智波等[11]通过单因素和响应面试验优化培养条件和培养基成分，结果显著提高了乳酸菌脂肪酶活。Abu 等[12]将耐热细菌脂肪酶基因导入毕赤酵母中进行表达，同时利用响应面法对培养基组分进行优化，脂肪酶活提高了3 倍。吴蓉等[13]将南极假丝酵母脂肪酶基因在大肠杆菌中进行表达和发酵优化，脂肪酶活提高了17.7 倍，是目前大肠杆菌生产脂肪酶的较高水平。孙建安[14]利用基因工程和发酵工程技术在枯草芽孢杆菌中高效表达脂肪酶，通过对碳源、氮源等培养基组分以及培养条件进行优化，最终脂肪酶活提高了5.62 倍。

    蚜虫莫氏黑粉菌(Moesziomyces aphidis，M.aphidis)是一种能够利用植物油作为单一碳源进行生长繁殖，并且大量合成甘露糖赤藓糖醇脂的菌株[15]，其可以高效利用和转化甘油三酯。目前，蚜虫莫氏黑粉菌的研究主要围绕甘露糖赤藓糖醇脂的合成和代谢调控展开，研究发现脂肪酶在合成甘露糖赤藓糖醇脂过程中具有重要作用，而关于其脂肪酶的合成和酶学特性研究基本处于空白[16]。

    基于此，本研究以蚜虫莫氏黑粉菌为试验菌株，以脂肪酶活为主要评价指标，进行单因素、Plackett-Burman、最陡爬坡和响应面等试验，对合成脂肪酶的培养基组成和发酵条件进行优化 ......