不同产地“宁杞1 号”枸杞果实的多糖合成代谢差异
果胶,1材料与方法,1材料与试剂,2设备与仪器,3方法,2结果与分析,1枸杞蛋白质质谱鉴定和聚类分析,2差异蛋白筛选与分析结果,3差异蛋白KEGG通路分析,4枸杞中多糖相关DEPs筛选,5蛋白质互作网络(PPI
马瑞雪,寇婷婷,孙霞芝,范艳丽(宁夏大学食品科学与工程学院 银川 750021)
枸杞(Lycium barbarum L.)属茄科,多年生落叶灌木,是我国珍贵的传统药用植物[1],也是药食同源品种之一[2],具有抗炎、抗老和神经保护等多种生物学功能[3-5]。其种植区域从传统的宁夏中宁产区,逐渐扩展为“宁夏道地产区为核心,青海、甘肃、新疆、内蒙为两翼”的大枸杞种植区[6]。枸杞多糖(Lycium Barbarum polysaccharides,LBP)是 枸杞的主要活性成分,是一种有效的抗氧化剂[7]。由于环境因素不同,导致不同产地枸杞的品质存在很大差异[8],而枸杞多糖结构和活性是否存在典型的地区差异,对其质量评价和产品研发有至关重要的作用[9]。
基于同位素标记相对和绝对定量(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation,i-TRAQ)技术的蛋白组学分析,广泛应用于植物蛋白的识别和定性、定量分析中,该技术可同时比较8 个样品的表达量[10]。目前关于不同产区枸杞多糖的研究已有报道。Wang等[9]的研究发现,青海产地的枸杞果实明显大于宁夏和新疆,而其产量低于其它产地,研究还发现不同产地枸杞多糖的单糖组成、分子质量和构象相似,抗氧化和免疫活性结果也一致。徐金楠等[11]通过对不同产地枸杞多糖结构特征对比,发现不同产地的枸杞多糖结构相似,且环境因素对多糖糖环形式和单糖组成的影响比品种因素大。在蛋白水平探究不同产地枸杞多糖差异的相关报道较少,课题组前期比较了不同产地枸杞多糖的含量、分子质量、单糖组成以及结构特征,通过iTRAQ 技术比较枸杞蛋白表达差异[12],而未分析枸杞多糖的相关蛋白。本文基于前期iTRAQ 定量蛋白组学技术,对不同产地“宁杞1号”枸杞果实的蛋白质进行分析,筛选出与枸杞多糖合成代谢相关的蛋白质,并初步推测枸杞多糖合成代谢相关通路,为不同产地枸杞多糖的差异提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
SDS(色谱纯)、Urea(色谱纯)、二硫苏糖醇(色谱纯)、碘乙酰胺(色谱纯),美国Bio-Rad 公司;碳酸氢铵(色谱纯)、Tris(色谱纯)、三氟乙酸(色谱纯),美国Sigma-Aldrich 公司;甲酸(色谱纯),德国Fluka 公司;乙腈(色谱纯),德国Merck 公司;其它试剂均为国产分析纯。
1.2 设备与仪器
液相色谱系统(Easy nLC)、质谱仪(Q Exactive)、微量紫外光度计(2000c)、酶标仪(Multiskcan FC) ......
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