全反式维甲酸对兔颈动脉粥样硬化病变中Cdk2表达及血管平滑肌细胞增生的影响(2)
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1 材料和方法
1.1 动物分组、给药方法及标本制备：选用体重(2.50±0.25)kg的纯种新西兰雄性大白 兔(青岛药检所)36只，随机分为三组，每组12只：(1)ATRA治疗组(T组)：高脂饮食(6%猪油 、 1.5%胆固醇混于基础饲料中)，2周后按Fishman等[8]方法行颈动脉内膜空气干燥 术，术前3d始给予ATRA(20mg/d)植物油混悬液灌胃至术后1、4周处死。取病变血管固定、脱 水、透明、石蜡包埋，测胆固醇和甘油三酯。(2)手术组(C组)：除给予等量植物油灌胃外， 操作同治疗组。(3)正常饮食组(N组)：普通饮食，术后1、4周后处死。
1.2 形态学观察：血管标本横截面切片(3μm)后，HE染色，光学显微镜下观察内膜增生情 况并用图像分析系统测定动脉横截面的腔面积(LA)、内膜面积(IA)、中膜面积(MA)、内膜/ 中膜面积比率(IA/MA)。
1.3 免疫组化染色：血管标本横截面切片(3μm)后，分别加入鼠抗兔PCNA单克隆抗体(北 京中杉生物制品公司)、PV6001(北京中杉生物制品公司)及兔抗兔Cdk2多克隆抗体(武汉博士 德生物制品公司)、PV6002(北京中杉生物制品公司)进行PCNA、Cdk2免疫组化染色，胞核棕 色(棕黄、棕、棕褐色)为阳性。每例动物用VIDAS图像分析仪随机测量每张切片的6个视野中 阳性细胞的平均光密度及阳性细胞百分率，取其平均值，用两者乘积作为阳性表达指数来表 示蛋白质的表达水平。
1.4 统计分析：用SPSS11.5进行方差分析、t检验。数据以x-±s表示。P<0.05为差别有显著意义，P<0.01为差 别有高度显著意义。
2 结果
2.1 兔血脂变化：所有实验动物无中途死亡或患病，实验组动物未发现局部感染，创口愈 合良好。术后第28d，正常饮食组血脂水平无变化。手术组与治疗组的动物血清TC、TG均较 喂饲高脂饮食前增高(P<0.05)，但两组间比较差异无显著性(P>0.05)(表1)。 说明高胆固醇血症兔模型是成功的，短期摄入ATRA没有降低血胆固醇和甘油三酯的作用 ......
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