Parthenokide对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的作用研究(2)
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1.4 MTT法检测Parthenolide对HUVECs增殖的影响：胰酶消化培养的HUVECs，收集离心， 计数后调整细胞密度至1×105/ml，接种于96孔板，实验组加入Parthenolide，调零组、 对 照组加培养基。培养结束前4h加MTT溶液，DMSO充分溶解后，酶标仪490nm处测吸光度(A) 值。细胞生长抑制率＝[1-(实验组平均A值-调零组平均A值)/(对照组平均A值-调零组平 均A值)]×100%。
1.5 TUNEL法检测细胞凋亡：HUVECs接种至培养板中，分为5、10、15μmol/L Parthenoli de组和对照组，分别作用6h、12h、24h。4%多聚甲醛固定30′；室温下含3%H2O2的甲醛封闭 10′；含0.1%TritonX-100的柠檬酸钠通透液冰上促渗2′；滴加50μL TDT酶反应液，37℃ 避光反应60′；滴加50μL Streptavidin-HRP工作液，37℃避光反应30′；滴加50μL DAB 工作液，室温反应10′；苏木素染液作用1′。每一步结束后均用PBS冲洗3次。结果判定： 阴性对照细胞核为蓝色，阳性细胞为胞核染成棕黄色，每一细胞爬片高倍镜下随机计数10个 视野，计算每个高倍视野中阳性细胞的百分率，平均值即为细胞的凋亡指数(AI)。
1.6 统计学处理：数据以x-±s表示。 采用SPSS 13.0统计软件分析，对计量资料组间比较采用单因素方差分析。P<0.05为 差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HUVECs的鉴定：倒置相差显微镜下观察，细胞接种12h后，呈透亮圆形并贴壁，2～3 d后逐渐伸展，呈多角行、梭形，5～8d细胞融合成铺路石状。Ⅷ因子相关抗原检测，镜下见 胞浆中呈现褐色颗粒，可证实为HUVECs。
2.2 Parthenolide对HUVECs增殖的影响：1、5μmol/L Parthenolide作用6h、12h、24h 后 ......
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