高浓度胰岛素对人树突状细胞分化\成熟及免疫功能的影响(1)
 |
| 第1页 |
参见附件(1567KB，3页)。
中图分类号：R446 文献标识码 ：A 文章编号：1009_816X(2010)02_0100_03
Effects of Hyperinsulin on the Development and Maturation and Immune Function ofHuman Derived Dendritic Cells. CHEN Li_ping, YE Shuang_ying, WU Rong_zhen, et al. Lishui Center Hospital, Zheji ang 323000, China
[Abstract] ObjectiveTo explore the effect of hyperinsulin on the maturation ofmonocyte_derived dendritic cells (DC).MethodsHuman monocytes were purifed usi ng successive adherence method, after 5 days' culture in RPMI1640 medium contain ing granulocyte_macrophage colony stimulating factor (GM_CSF，100ng/ml) and in terleukin_4(IL_4，100ng/ml). Immature DC were then incubated with various conc entrations (0, 10, 100nmol/L) insulin for 48 hours. Immunophenotypic expressionof CD40, CD80 and CD83 was detected using flow cytometry. Mature DC secretions o f IL_12, IL_10 and TNF_α were measured by ELISA. The utralmicro structure of de ndritic cells was observed by microscope.ResultsHyperinsulin promoted CD40, CD 80 and CD83 expression and enhanced to excrete cytokine secretions of IL_12 andTNF_α significantly and decreased the excrete cytokines IL_10 secretion in heal thy human.ConclusionsHyperinsulin contributed to atherosclerosis via stimulati ng immune maturation of mature DC，which may be one of its mechanisms of AS.
[Key words] Insulin; Dendriti cells; Immunity; Atherosclerosis
目前，越来越多的证据认为动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)从发生发展到转归就是一 个慢性炎症过程，其本质为免疫反应介导的慢性血管炎症病变[1，2]。免疫炎症反 应的发生和放大需要抗原递呈，而树突状细胞(Dendritic cells，DCs)是机体功能最强的专 职抗原递呈细胞。早年研究显示在动脉粥样硬化早期斑块中发现的树突状细胞明显低于晚期 斑块中发现的树突状细胞，脆性斑块中树突状细胞明显多于稳定斑块中树突状细胞[3 ]，这些发现表明树突状细胞与动脉粥样硬化发生发展有关。进而发现颈动脉脆性斑块中 有超过70%的树突状细胞表达活化标志物如CD83等[4]。胰岛素抵抗是动脉粥样硬 化风险相关的一个重要环节和过程，炎症反应是动脉粥样硬化和胰岛素抵抗的共同发病基础 。本实验旨在通过分离培养正常人DCs,使用高浓度胰岛素加以干预，通过测定DCs表型(CD40 、CD80、CD83)和检测分泌的细胞因子(1L_12、IL_10、TNF_α)，探讨高浓度胰 岛素对DCs分化、成熟的影响。
1 材料与方法
1.1 实验材料：
1.1.1 对象：抽取健康志愿者的外周静脉血40ml。所有对象均排除急慢性炎性疾病， 未用激素及免疫抑制剂。
1.1.2 主要试剂：PBS和RPMI1640培养基购自美国GIBCO公司产品：特级无支原体无热 源胎牛血清购自美国BD公司产品；人淋巴细胞分离液购自天津市TBD生物技术有限公司产品 ；青霉素、链霉素购自华北制药有限公司产品：细胞因子rhGM_CSF、rhIL_4、TNF_α均为英国PEPRO Tech公司产品；CD83、CD40单抗、CD40二抗、CD80购自美国BD公司：IL_12、IL_10 、TNF_α购自上海森雄科技实业有限公司。
1.2 方法：
1.2.1 细胞培养：细胞培养方法详见文献报道[5]。第5日收集细胞，调整细胞 浓度1.0×106/ml,置于24孔板中，加入培养液1ml，分别加入胰岛素0ng/ml、10ng/ml和 100ng/ml继续置37℃、5%CO2孵箱培养48小时后，收集细胞和上清液，细胞流式细胞仪检 测DC表型，上清液-70℃冰箱保存，留作ELISA法检测分泌的细胞因子IL_12、IL_10和TNF_α 。
1.2.2 流式细胞仪检测DC细胞免疫表型：采用直接免疫莹光染色法，在流式细胞仪上检 测分析。收集DC,用PBS液清洗2次，将细胞转移至流式管，用200ul的PBS重悬，调整细胞浓 度1×106，各管分别加入CD45_FITC ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1567KB，3页)。