急性冠脉综合征患者外周血单核细胞miR—145与超敏C反应蛋白的相关性研究(1)
[摘要]目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者外周血单核细胞(PBMCs)miR-145与超敏C反应蛋白的相关性。方法选取急性冠脉综合征患者90例，其中不稳定型心绞痛(UAP)30例(A组)，ST段抬高型心肌梗死(STEMl)30例(B组)和非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMl)30例(C组)。另外30例以心前区不适住院，既往无高血压、糖尿病和冠心病史，经心电图、心肌酶学和冠状动脉造影排除冠心病者作为对照组(D组)。采用Rcal-time PCR法检测PBMCs中miR-145表达水平，使用U6作为内参对照。采用ELISA法检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。结果A组、B组、C组分别与D组比较，ACS患者外周血单核细胞miR-145表达水平明显降低，均有统计学意义(P<0.05)；A组、B组、C组分别与D组比较，PBMCs培养基上清中细胞因子hs-CRP水平明显升高，均有统计学意义(P< 0.05)；Pcarson相关分析结果显示，ACS患者外周血单核细胞miR-145表达与hs-CRP水平呈负相关性(r=-0.84，P<0.05)。结论ACS患者外周血单核细胞miR-145与超敏C反应蛋白之间呈负相关性，可能成为ACS新型标志物。
[关键词]急性冠脉综合征；外周血单核细胞miR-145；超敏C反应蛋白
中图分类号：l541.4 文献标识码：A 文章编号：1009-816X(2015)05-0359-03
急性冠脉综合征(Axute coronary svndrom，ACS)作为常见的心脏急症，是心血管疾病中致死致残的主要原因，包括不稳定心绞痛(Unstable Angina Pectoris，UAP)和急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)，而AMI包括非ST段抬高型心肌梗死(Non-ST-Elevation MvocaHlial Infarction，NSTEMI)、ST段抬高型心肌梗死(ST-Elevation Myocardial Infarction，SIEMI)。文献报道，m1R-145在正常动脉血管和已分化的血管平滑肌(VSMCs)中表达最丰富，但在球囊损伤血管、ACS及去分化的VSMCs中表达很低。miR-145是VSMCs的表型调节器，通过对VSMCs的调节而成为ACS的保护因子，但在ACS中的表达情况目前尚不明确。本文对ACS患者血浆miR-145变化及其与hs-CRP的相关性进行探讨。
1.资料与方法
1.1.临床资料：选取2011年3月至2014年3月本院住院确诊为ACS患者90例，UAP、AMI诊断均按美国心脏病学会/美国心脏协会(2009年)标准，且均经冠状动脉造影证实。其中30例UAP(A组)，60例AMI分为30例SIEMI(B组)和30例NSTEMI(C组)。另外30例以心前区不适住院，既往无高血压、糖尿病和冠心病史，经心电图、心肌酶学和冠状动脉造影排除冠心病者作为对照组(D组)。本研究经伦理委员会批准，所有患者均自愿加入并签署知情同意书。
1.2.方法：患者均在发病6h内从静脉采取空腹血3ml，肝素钠抗凝。PBMCs采用人外周血淋巴细胞分离液密度梯度离心法进行分离：①置于EDTA—N0抗凝管，将新鲜血液转移至15ml离心管中，加入无菌的5mlPBS等倍稀释血液，上下颠倒混勾。②避光吸取5ml淋巴细胞分离液置于另一l5ml离心管，用吸管吸取稀释的血液，沿管壁小心缓慢加于淋巴细胞分离液上方，形成清晰界面。放入平衡离心机，室温下，2000转/min，离心30min。③离心后可以观察到管内液体分为三层，上层为淡黄色的血浆和PBS，下层主要是红细胞层，层为分离液层，上中层界面一层白色絮状物质即为单个核细胞层或白膜层。④用吸管小心吸取白膜层，置于另一l5ml离心管中，加入2～3倍体积的无菌PBS，上下颠倒混匀，2000转/min，离心10min。⑤倒掉上清，同法沉淀洗涤两次。⑥将⑤所得单个核细胞用900μL Trizol重悬，吸取置于无酶无菌1.5ml EP管中，暂时冻存于-80℃冰箱中以备提取RNA。
采用Real—time PCR法(ABI9700型PCR扩增仪由美国ABI公司：荧光定量PCR仪由德国Eppendorf公司：hsa-miR-145 real—time及RT—PCR引物由广州锐博生物科技有限公司：U6 real—time及RT—PCR引物由广州锐博生物科技有限公司提供)检测PBMCs中miR-145表达水平，使用U6作为内参对照。分离的PBMCs用含10%小牛血清的RPMI1640调整细胞浓度2×106/ml，加入植物血凝素(PHA)5ng/ml浓度，置于37℃，5%C02培养箱培养48h后，收集上清液储存于-20℃用于hs-CRP检测。采用ELISA法(美国Beckman公司的IM-MAG全自动特种蛋白分析系统)检测hs-CRP水平，试剂盒由Beckman公司提供，严格按照试剂盒的说明操作。
2.结果
2.1.一般临床资料比较：A组、B组、C组分别与D组比较，在年龄、性别、体质指数(BMI)、舒张压(SBP)、收缩压(DBP)、空腹血糖(FPG)等构成上无统计学意义(P>0.05)；A组、B组、C组分别与D组比较，ACS患者总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显升高，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低，均有统计学意义(P<0.05)。
2.2.四组m1R-145相对表达水平：A组、B组、C组分别与D组比较，ACS患者外周血单核细胞miR-145相对表达水平明显降低，均有统计学意义(P<0.05)。且A组、B组、C组之间无统计学差异(P>0.05)。采用ELISA法检测hs-CRP水平，PBMCs培养基上清中细胞因子检测结果表明，A组、B组、C组分别与D组比较，PBMCs培乔基上清中细胞因子hs-CRP水平明显升高，均有统计学意义(P<0.05)，且A组、B组、C组之间无统计学差异(P>0.05)，见表1。, http://www.100md.com(姜春玲)
[关键词]急性冠脉综合征；外周血单核细胞miR-145；超敏C反应蛋白
中图分类号：l541.4 文献标识码：A 文章编号：1009-816X(2015)05-0359-03
急性冠脉综合征(Axute coronary svndrom，ACS)作为常见的心脏急症，是心血管疾病中致死致残的主要原因，包括不稳定心绞痛(Unstable Angina Pectoris，UAP)和急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)，而AMI包括非ST段抬高型心肌梗死(Non-ST-Elevation MvocaHlial Infarction，NSTEMI)、ST段抬高型心肌梗死(ST-Elevation Myocardial Infarction，SIEMI)。文献报道，m1R-145在正常动脉血管和已分化的血管平滑肌(VSMCs)中表达最丰富，但在球囊损伤血管、ACS及去分化的VSMCs中表达很低。miR-145是VSMCs的表型调节器，通过对VSMCs的调节而成为ACS的保护因子，但在ACS中的表达情况目前尚不明确。本文对ACS患者血浆miR-145变化及其与hs-CRP的相关性进行探讨。
1.资料与方法
1.1.临床资料：选取2011年3月至2014年3月本院住院确诊为ACS患者90例，UAP、AMI诊断均按美国心脏病学会/美国心脏协会(2009年)标准，且均经冠状动脉造影证实。其中30例UAP(A组)，60例AMI分为30例SIEMI(B组)和30例NSTEMI(C组)。另外30例以心前区不适住院，既往无高血压、糖尿病和冠心病史，经心电图、心肌酶学和冠状动脉造影排除冠心病者作为对照组(D组)。本研究经伦理委员会批准，所有患者均自愿加入并签署知情同意书。
1.2.方法：患者均在发病6h内从静脉采取空腹血3ml，肝素钠抗凝。PBMCs采用人外周血淋巴细胞分离液密度梯度离心法进行分离：①置于EDTA—N0抗凝管，将新鲜血液转移至15ml离心管中，加入无菌的5mlPBS等倍稀释血液，上下颠倒混勾。②避光吸取5ml淋巴细胞分离液置于另一l5ml离心管，用吸管吸取稀释的血液，沿管壁小心缓慢加于淋巴细胞分离液上方，形成清晰界面。放入平衡离心机，室温下，2000转/min，离心30min。③离心后可以观察到管内液体分为三层，上层为淡黄色的血浆和PBS，下层主要是红细胞层，层为分离液层，上中层界面一层白色絮状物质即为单个核细胞层或白膜层。④用吸管小心吸取白膜层，置于另一l5ml离心管中，加入2～3倍体积的无菌PBS，上下颠倒混匀，2000转/min，离心10min。⑤倒掉上清，同法沉淀洗涤两次。⑥将⑤所得单个核细胞用900μL Trizol重悬，吸取置于无酶无菌1.5ml EP管中，暂时冻存于-80℃冰箱中以备提取RNA。
采用Real—time PCR法(ABI9700型PCR扩增仪由美国ABI公司：荧光定量PCR仪由德国Eppendorf公司：hsa-miR-145 real—time及RT—PCR引物由广州锐博生物科技有限公司：U6 real—time及RT—PCR引物由广州锐博生物科技有限公司提供)检测PBMCs中miR-145表达水平，使用U6作为内参对照。分离的PBMCs用含10%小牛血清的RPMI1640调整细胞浓度2×106/ml，加入植物血凝素(PHA)5ng/ml浓度，置于37℃，5%C02培养箱培养48h后，收集上清液储存于-20℃用于hs-CRP检测。采用ELISA法(美国Beckman公司的IM-MAG全自动特种蛋白分析系统)检测hs-CRP水平，试剂盒由Beckman公司提供，严格按照试剂盒的说明操作。
2.结果
2.1.一般临床资料比较：A组、B组、C组分别与D组比较，在年龄、性别、体质指数(BMI)、舒张压(SBP)、收缩压(DBP)、空腹血糖(FPG)等构成上无统计学意义(P>0.05)；A组、B组、C组分别与D组比较，ACS患者总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显升高，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低，均有统计学意义(P<0.05)。
2.2.四组m1R-145相对表达水平：A组、B组、C组分别与D组比较，ACS患者外周血单核细胞miR-145相对表达水平明显降低，均有统计学意义(P<0.05)。且A组、B组、C组之间无统计学差异(P>0.05)。采用ELISA法检测hs-CRP水平，PBMCs培养基上清中细胞因子检测结果表明，A组、B组、C组分别与D组比较，PBMCs培乔基上清中细胞因子hs-CRP水平明显升高，均有统计学意义(P<0.05)，且A组、B组、C组之间无统计学差异(P>0.05)，见表1。, http://www.100md.com(姜春玲)