黄酒多酚抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转化(3)
17细胞免疫荧光法检测各组中SM_actin在细胞中的分布及表达：将第4～7代细胞接种于96孔板，每孔3000～5000个细胞，待细胞贴壁后加入各组干预因子，在细胞融合之前进行检测。先PBS洗三遍，用4%多聚甲醛固定，025%Triton X 100穿破细胞膜，山羊血清室温封闭1h，加入稀释了250倍的anti_SMA抗体，4℃过夜，PBST清洗三遍之后加入结合有FICT或者FRICT的山羊抗兔二抗，室温孵育一小时后PBST清洗三遍，荧光显微镜拍照后图片用iamge pro plus 60分析。18Western blot测定VSMCs中SM_actin、calponin、OPN的表达：各个干预因子干预48小时之后，裂解VSMCs提取蛋白，BCA法蛋白定量，SDS_PAGE胶每孔加入20μl样品，80V 30min进行蛋白浓聚，120V 2小时进行凝胶电泳，并用孔径045μm硝酸纤维素膜250mA 90min进行转膜。转膜完毕经常温下TBST洗膜x3、脱脂奶粉封闭2小时后，以1：1000浓度加入兔抗鼠SM_actin一抗(或抗calponin、SM_MHC、OPN、β_actin一抗) ......
您现在查看是摘要页，全文长 4161 字符。