细胞角蛋白、上皮钙粘蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达(1)
 |
 |
 |
【中图分类号】 R736.1 【文献标识码】 A 【文章编号】1185-1672(2008)- 08-0710-02
摘要 目的检测细胞角蛋白(cytokeratin，CK19)、上皮钙粘蛋白( E-cadherin，E-cad) 在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中的表达，筛选甲状腺乳头状癌的辅助诊断指标及预测淋巴结 转移的可能性。方法采用免疫组化S-P法，DAB显色检测结节性甲状腺 肿伴乳头状增生15例，乳头状癌32例(无淋巴结转移22例，有淋巴结转移10例)中CK19、Ecad herin的表达。结果 ①CK19表达以甲状腺乳头状癌有淋巴结转移最强(100%)，无淋巴结转移较低(90.9%)，甲状 腺乳头状增生更低(20%)，三者差异有显著性(X2= 29.371，P<0.05)。② E-Ca dherin表达以甲状腺乳头状增生最强(100%)，甲状腺乳头状癌无淋巴结转移较低(36.4%)， 有淋巴结转移更低(10%)，三者差异有显著性(X2= 25.647，P<0.05)。③ 根据 两种蛋白表达阳性率统计学分析，两种蛋白表达强度相互之间相关性没有统计学意义。 结论 ① 甲状腺乳头状癌组织中CK19表达率增高，而E-cadherin表达率低。 ② CK19、E-cadherin对于甲状腺乳头状癌的诊断具有一定的指导作用。③ E-cadherin可作 为预测淋巴结转移的指标。
关键词 细胞角蛋白；上皮钙粘蛋白；甲状腺 乳头状癌；蛋白表达；免疫组化
甲状腺癌是头颈部比较常见的恶性肿瘤，占全身恶性肿瘤的1%～2%，女性多见，其发病率近 年来呈上升趋势，绝大多数都发生在青壮年。甲状腺乳头状癌(PTC)是最常见的甲状腺恶性 肿瘤。由于PTC临床症状，体征不明显，影像学检查也不能发现典型的形态特点，以致于常 被误诊为良性病变，这样更增加了PTC临床诊断的难度。因此有必要研究其它有利于鉴别诊 断和预测淋巴结转移的辅助诊断指标。本实验研究甲状腺良恶性病变组织中之CK19、Ecadhe rin之间的表达关系，以提高甲状腺肿瘤病理诊断的准确性，对于甲状腺乳头状癌的临床诊 断具有重要的指导作用。
1 实验材料及方法
1.1 标本来源 选取承德市中心医院自2002～2006年间手术切除的甲状 腺标本，按病理组织 学诊断标准，分别为结节性甲状腺肿伴乳头状增生15例，甲状腺乳头状癌32例(无淋巴结转 移22例，有淋巴结转移10例)分为3组。全部标本常规10%中性福尔马林液固定，石 蜡包埋， 连续切片，切片厚度 4μm，均经病理诊断证实。甲状腺乳头状癌32例，男3例，女29例， 平均年龄38岁(24～68岁)，区域淋巴结转移10例，无淋巴结转移22例，良性病变中结节性 甲状腺肿15 例，平均年龄51岁(40～71岁)。所有患者术前均未接受放疗和化疗，均有 完整临床资料。
1.2 主要试剂鼠抗人CK19、E-Cadherin单克隆抗体 购自福州迈新生物技术开发公司。生物 素化II抗、辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素、DAB显色剂、多聚赖氨酸粘附剂、封闭用的 正常山羊血清均购于福州迈新公司。
1.3 实验方法
1.3.1 标本准备 采用免疫组化S-P法，各组标本常规石蜡切片，高温修 复抗原，免疫组化S-P法，DAB显色。
1.3.2 对照实验 分别用已知CK19、E-cadherin阳性甲 状腺癌切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
1.3.3 结果判断 以正常粘膜上皮细胞或肿瘤细胞胞浆 出现棕黄色颗粒为阳性，阳性表达的 判断按照Volm等的判断标准：选染色均匀的肿瘤区，在400倍视野下计数着色细胞占视野细 胞总数的百分数，共计数5个视野，取平均值，以着色细胞占视野细胞总数的多少分0～3级 ，0级：0；1级：<25%；2级：26%～50%；3级：>50%。本试验中0级为阴性(-)，1级为 弱阳性(+)，2～3级为强阳性(++)。
1.4 统计学分析 采用卡方检验、秩和检验、Spearman 等级相关检验，应用SPSS11.0 统计软件包在计算机上完成。
2 实验结果
2.1 CK19在甲状腺乳头状增生与甲状腺乳头状癌的表达 CK19表达于阳性细胞的细胞浆，呈棕黄色颗粒及弥漫性着色。在15例甲状腺乳头状增生中3( 20%)例呈弱阳性，余12(80%)例呈阴性，无强阳性表达病例；在22例甲状腺乳头状癌无淋 巴结转移中17(77.3%)强阳性，3(13.6%)例弱阳性，2(9%)例呈阴性；在10例甲状腺乳 头状癌有淋巴结转移中全部阳性表达，其中8(80%)例强阳性，2(20%)例弱阳性。甲状腺 乳头状增生组(20%)与甲状腺乳头状癌无淋巴结转移组(91%)，两者表达差异有高度显著性 (P<0.01)，甲状腺乳头状增生组与甲状腺乳头状癌有淋巴结转移组(100%)，两者表 达差异亦有高度显著性(P<0.01)，甲状腺乳头状癌有淋巴结转移组与无淋巴结转移组 差别没有显著性(P>0.05)。CK19表达以甲状腺乳头状癌有淋巴结转移最强，无淋巴 结转移较低，甲状腺乳头状增生更低，三者差异有显著性(H= 29.371，P<0.05)。见 表1。
三组秩和检验，H = 29.371, P<0.05,①—②P<0.01，①—③P<0.01，②—③P>0.05
2.2 E-cadherin在甲状腺乳头状增生与甲状腺乳头状癌的表达 E-cadherin表达于阳性细胞的细胞膜、细胞浆，呈棕黄色颗粒及弥漫性着色，有极少细胞核 着色。在15例甲状腺乳头状增生中全部阳性表达，其中5(33.3%)例强阳性，10(66.7%) 例弱阳性；在22例甲状腺乳头状癌无淋巴结转移中8(36.4%)例弱阳性，14(63.6%)例呈 阴性，无强阳性表达病例；在10例甲状腺乳头状癌有淋巴结转移中1(10%)例弱阳性，9(9 0%)例呈阴性，亦无强阳性表达病例。甲状腺乳头状增生组(100%)与甲状腺乳头状癌无淋 巴结转移组(36.4%)，两者表达差异有高度显著性(P<0.01)，甲状腺乳头状增生组 与甲 状腺乳头状癌有淋巴结转移组(10%)，两者表达差异亦有高度显著性(P<0.01)，甲 状腺 乳头状癌有淋巴结转移组与无淋巴结转移组差别有显著性(P<0.05)。E-cadherin表达 以甲 状腺乳头状增生最强，甲状腺乳头状癌无淋巴结转移较低，有淋巴结转移更低，三者差异有 显著性(H= 25.647，P<0.05)。见表2。
三组秩和检验，H = 25.647P<0.05, ①—②P<0.01，①—③P<0.01，②—③P<0.05
2.3 两种蛋白表达强度的相关性 两种蛋白表达强度相互之间相关性没有统计学意义。见表3。
Spearman 等级相关系数为0，P=1
3 讨论
甲状腺肿瘤较为常见，甲状腺的良性增生性病变、良性腺瘤和癌都表现为甲状腺结节，甲状 腺良恶性病变的临床生物学行为不同、手术处理方法不同、预后也不同。甲状腺癌是一种起 源于内分泌器官的常见恶性肿瘤，发生于滤泡上皮的癌主要有乳头状和滤泡状二种主要组织 学类型。而甲状腺乳头状癌是甲状腺恶性肿瘤中发病率最高的一种类型，预后比其他类型癌 好，故对乳头状癌的准确诊断十分必要。世界卫生组织肿瘤学分类将甲状腺乳头状癌界定为 "具有明确的滤泡细胞分化，典型的乳头及滤泡结构，特征性胞核改变的甲状腺恶性上皮肿 瘤"。光镜下典型的甲状腺乳头状癌的基本结构为有纤维血管轴心的乳头状结构。但是，在 临床病理诊断中常常遇到不典型病例，常误诊为良性增生性滤泡、滤泡性腺瘤等，这些误诊 在甲状腺冰冻切片及细针穿刺细胞涂片时更容易发生[1]。因此，许多学者尝试利 用免疫组织化学方法辅助诊断甲状腺乳头状癌。, 百拇医药