观察大鼠全脑缺血后脑组织Bcl-2 Fas基因表达相关性的进展(1)
【中图分类号】R596.2【文献标识码】A【文章编号】1185-1672(2009)-12-1057-02
【摘要】目的通过对大鼠全脑缺血再灌注不同时间点脑组织Bcl-2、Fas蛋白表达情况的观察,阐述了缺血再灌注后Bcl-2、Fas蛋白表达的过程及其规律,为临床治疗性、实验性用药提供参考时间表。方法采用Wistar大鼠四血管结扎模型,造成全脑缺血,于再灌注不同时间点上处死动物,取脑、石蜡包埋、冠状切片、HE染色、Bcl-2、Fas免疫组化、光镜观察。结果Bcl-2蛋白表达在缺血再灌注早期,即24h内呈增加趋势,24h达高峰,以后随着再灌注时间的延长Bcl-2蛋白表达呈下降趋势;Fas蛋白在损伤细胞增多的时间点上表达增强。结论Bcl-2表达与神经元存活密切相关,对神经元起保护作用。Fas蛋白表达介导了脑缺血后细胞损伤的发生。并可能参与了迟发性神经元死亡。
【关键词】大鼠;脑缺血;Bcl-2蛋白;Fas蛋白
, http://www.100md.com
Globalcerebralischemiaintheratbraintissueafter
Bcl-2Fasgeneexpressionoftheprogressof
MaLinlin,LiuHua,XingYubin
People'sLiberationArmyInstituteofBiologicalGenedifficultdisease,102600,China
【Abstract】Objective
bycerebralischemia-reperfusionbraintissueatdifferenttimepointsBcl-2,Fasproteinexpressionobservedafterischemia-reperfusiondescribedBcl-2,Fasproteinexpressioninthecourseofitslaws,forclinicaltherapeutic,experimentaldrugreferencetimetable.Methods
, 百拇医药
Wistarratswerefour-vesselocclusionmodel,resultingincerebralischemiaandreperfusion,animalsweresacrificedatdifferenttimepoints,takethebrain,embeddedinparaffin,coronalsections,HEstaining,Bcl-2,Fasimmunohistochemistry,lightmicroscope.Results
Bcl-2proteinexpressioninischemia-reperfusionearlystage,thatis,within24hshowedanincreasingtrend,24hreachedthepeakafterthereperfusiontimeastheextensionofBcl-2proteinexpressionshowedadownwardtrend;Fasproteinincells,increaseddamageexpressionincreasedonthepointintime.Conclusion
, 百拇医药
Bcl-2expressionandneuronalsurvivaliscloselyrelatedtotheprotectiveeffectonneurons.Fasproteinexpressioninischemia-mediatedbraincelldamage.Andmaybeinvolvedinthedelayedneuronaldeath.
【Keywords】Rat;Cerebralischemia;Bcl-2protein;Fasprotein
全脑缺血在临床上多发生于心律失常、心肌梗死以及休克等造成的脑部血液灌流量低,缺血范围广。大鼠全脑缺血动物模型与临床上脑缺血虽不完全相同,但全脑缺血后Bcl-2、Fas蛋白表达情况的研究对于临床上在脑缺血后的治疗方面具有指导意义。同时研究Bcl-2和Fas蛋白在缺血损伤细胞中的表达,并发现二者在表达上存在的内在相互关系,目前在国内还是首例,如果能将研究结果运用到临床实践工作中,在损伤细胞中促进Bcl-2蛋白表达,阻止Fas蛋白在损伤细胞中的表达,那么就能够挽救“半暗带"中的细胞生命,使缺血损伤细胞数量减少在最小范围内,这正是本实验的价值和临床意义所在。
, 百拇医药
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物健康成年雄性Wistar大鼠77只,体重280～340g。
1.1.2主要试剂麻醉剂、光镜灌注液及固定液、染色剂、免疫组化试剂:兔抗大鼠Bcl-2抗体、兔抗大鼠Fas抗体、SABC试剂盒。
1.2实验方法
1.2.1分组将77只大鼠随机分为:正常组、假手术组、单次缺血8min组,分别于缺血后2h、6h、14h、24h、2天、3天、5天、7天、14天,于不同时间点处死大鼠,每组7只,总共分组11组。
1.2.2手术称重、麻醉、暴露并分离颈总动脉和迷走神经、电凝椎动脉、夹闭缺血:24h后夹闭双侧颈总动脉,造成4血管闭塞全脑缺血,缺血8min。处死:在缝合后2h、6h、14h、24h、2天、3天、5天、7天、14天,不同时间点处死大鼠,取脑进行48h外固定。正常组7只大鼠不做任何处理。假手术组7只,手术操作程序与实验组相同,电凝椎动脉后,不做颈总动脉夹闭,亦于不同时间点处死大鼠。
, http://www.100md.com
1.3免疫组化标本制备取材、脱水、透明、浸蜡、包埋粘块、切片、免疫组化采用SABC法,Bcl-2单克隆抗体,Fas单克隆抗体,Ⅰ抗和Ⅱ抗工作液均购于武汉博士德公司。
1.4光镜下观测
2结果
2.1免疫组化结果Bcl-2和Fas蛋白表达,在放大400倍的显微镜下,观察同一位的皮层、海马的神经细胞及神经胶质细胞的阳性细胞情况,表示结果的方法是:(-)表示:几乎没有Bcl-2和Fas蛋白表达,阳性细胞数≤10%;(+)表示:少量Bcl-2和Fas蛋白表达,阳性细胞数在10%～40%之间;(++)表示:中等度、较多Bcl-2和Fas蛋白表达,阳性细胞数在40%～70%之间;(+++)表示:最强烈Bcl-2和Fas蛋白表达,阳性细胞在70%～100%之间。
2.2Bcl-2蛋白表达结果正常组及假手术组未见Bcl-2蛋白表达,其阳性细胞为细胞膜及细胞浆呈棕黄色染色。Bcl-2蛋白阳性反应细胞于再灌注2h开始个别细胞出现表达,24h内随再灌注时间增加阳性反应细胞迅速增加,增加数量明显,于再灌注24h细胞阳性表达最多,达到高峰,随后于再灌注第2天、第3天,明显下降,第5天、第7天有少量阳性细胞表达,第14天几乎没有阳性细胞表达。Bcl-2蛋白表达的范围以皮层为主,海马CA1区有表达,但CA1区表达数量较皮层少。
2.3Fas蛋白表达结果正常组及假手术组未见Fas蛋白表达,其阳性细胞为细胞膜、细胞浆及细胞核呈棕黄色染色,Fas蛋白阳性反应细胞于再灌注2h最早开始出现,但阳性细胞数量不多,24h内随着再灌注时间增加阳性细胞数量略有增加,但不是很明显。随后的第2天、第3天阳性细胞数量逐渐增加,于再灌注第5天Fas蛋白表达最多,以后第7天、第14天Fas蛋白表达数量出现下降,Fas蛋白表达广泛分布于皮层及海马的神经细胞及神经胶质细胞,对缺血较敏感的海马大锥体细胞亦有表达。, http://www.100md.com(马琳琳 刘 华 邢玉斌)
【摘要】目的通过对大鼠全脑缺血再灌注不同时间点脑组织Bcl-2、Fas蛋白表达情况的观察,阐述了缺血再灌注后Bcl-2、Fas蛋白表达的过程及其规律,为临床治疗性、实验性用药提供参考时间表。方法采用Wistar大鼠四血管结扎模型,造成全脑缺血,于再灌注不同时间点上处死动物,取脑、石蜡包埋、冠状切片、HE染色、Bcl-2、Fas免疫组化、光镜观察。结果Bcl-2蛋白表达在缺血再灌注早期,即24h内呈增加趋势,24h达高峰,以后随着再灌注时间的延长Bcl-2蛋白表达呈下降趋势;Fas蛋白在损伤细胞增多的时间点上表达增强。结论Bcl-2表达与神经元存活密切相关,对神经元起保护作用。Fas蛋白表达介导了脑缺血后细胞损伤的发生。并可能参与了迟发性神经元死亡。
【关键词】大鼠;脑缺血;Bcl-2蛋白;Fas蛋白
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Globalcerebralischemiaintheratbraintissueafter
Bcl-2Fasgeneexpressionoftheprogressof
MaLinlin,LiuHua,XingYubin
People'sLiberationArmyInstituteofBiologicalGenedifficultdisease,102600,China
【Abstract】Objective
bycerebralischemia-reperfusionbraintissueatdifferenttimepointsBcl-2,Fasproteinexpressionobservedafterischemia-reperfusiondescribedBcl-2,Fasproteinexpressioninthecourseofitslaws,forclinicaltherapeutic,experimentaldrugreferencetimetable.Methods
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Wistarratswerefour-vesselocclusionmodel,resultingincerebralischemiaandreperfusion,animalsweresacrificedatdifferenttimepoints,takethebrain,embeddedinparaffin,coronalsections,HEstaining,Bcl-2,Fasimmunohistochemistry,lightmicroscope.Results
Bcl-2proteinexpressioninischemia-reperfusionearlystage,thatis,within24hshowedanincreasingtrend,24hreachedthepeakafterthereperfusiontimeastheextensionofBcl-2proteinexpressionshowedadownwardtrend;Fasproteinincells,increaseddamageexpressionincreasedonthepointintime.Conclusion
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Bcl-2expressionandneuronalsurvivaliscloselyrelatedtotheprotectiveeffectonneurons.Fasproteinexpressioninischemia-mediatedbraincelldamage.Andmaybeinvolvedinthedelayedneuronaldeath.
【Keywords】Rat;Cerebralischemia;Bcl-2protein;Fasprotein
全脑缺血在临床上多发生于心律失常、心肌梗死以及休克等造成的脑部血液灌流量低,缺血范围广。大鼠全脑缺血动物模型与临床上脑缺血虽不完全相同,但全脑缺血后Bcl-2、Fas蛋白表达情况的研究对于临床上在脑缺血后的治疗方面具有指导意义。同时研究Bcl-2和Fas蛋白在缺血损伤细胞中的表达,并发现二者在表达上存在的内在相互关系,目前在国内还是首例,如果能将研究结果运用到临床实践工作中,在损伤细胞中促进Bcl-2蛋白表达,阻止Fas蛋白在损伤细胞中的表达,那么就能够挽救“半暗带"中的细胞生命,使缺血损伤细胞数量减少在最小范围内,这正是本实验的价值和临床意义所在。
, 百拇医药
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物健康成年雄性Wistar大鼠77只,体重280～340g。
1.1.2主要试剂麻醉剂、光镜灌注液及固定液、染色剂、免疫组化试剂:兔抗大鼠Bcl-2抗体、兔抗大鼠Fas抗体、SABC试剂盒。
1.2实验方法
1.2.1分组将77只大鼠随机分为:正常组、假手术组、单次缺血8min组,分别于缺血后2h、6h、14h、24h、2天、3天、5天、7天、14天,于不同时间点处死大鼠,每组7只,总共分组11组。
1.2.2手术称重、麻醉、暴露并分离颈总动脉和迷走神经、电凝椎动脉、夹闭缺血:24h后夹闭双侧颈总动脉,造成4血管闭塞全脑缺血,缺血8min。处死:在缝合后2h、6h、14h、24h、2天、3天、5天、7天、14天,不同时间点处死大鼠,取脑进行48h外固定。正常组7只大鼠不做任何处理。假手术组7只,手术操作程序与实验组相同,电凝椎动脉后,不做颈总动脉夹闭,亦于不同时间点处死大鼠。
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1.3免疫组化标本制备取材、脱水、透明、浸蜡、包埋粘块、切片、免疫组化采用SABC法,Bcl-2单克隆抗体,Fas单克隆抗体,Ⅰ抗和Ⅱ抗工作液均购于武汉博士德公司。
1.4光镜下观测
2结果
2.1免疫组化结果Bcl-2和Fas蛋白表达,在放大400倍的显微镜下,观察同一位的皮层、海马的神经细胞及神经胶质细胞的阳性细胞情况,表示结果的方法是:(-)表示:几乎没有Bcl-2和Fas蛋白表达,阳性细胞数≤10%;(+)表示:少量Bcl-2和Fas蛋白表达,阳性细胞数在10%～40%之间;(++)表示:中等度、较多Bcl-2和Fas蛋白表达,阳性细胞数在40%～70%之间;(+++)表示:最强烈Bcl-2和Fas蛋白表达,阳性细胞在70%～100%之间。
2.2Bcl-2蛋白表达结果正常组及假手术组未见Bcl-2蛋白表达,其阳性细胞为细胞膜及细胞浆呈棕黄色染色。Bcl-2蛋白阳性反应细胞于再灌注2h开始个别细胞出现表达,24h内随再灌注时间增加阳性反应细胞迅速增加,增加数量明显,于再灌注24h细胞阳性表达最多,达到高峰,随后于再灌注第2天、第3天,明显下降,第5天、第7天有少量阳性细胞表达,第14天几乎没有阳性细胞表达。Bcl-2蛋白表达的范围以皮层为主,海马CA1区有表达,但CA1区表达数量较皮层少。
2.3Fas蛋白表达结果正常组及假手术组未见Fas蛋白表达,其阳性细胞为细胞膜、细胞浆及细胞核呈棕黄色染色,Fas蛋白阳性反应细胞于再灌注2h最早开始出现,但阳性细胞数量不多,24h内随着再灌注时间增加阳性细胞数量略有增加,但不是很明显。随后的第2天、第3天阳性细胞数量逐渐增加,于再灌注第5天Fas蛋白表达最多,以后第7天、第14天Fas蛋白表达数量出现下降,Fas蛋白表达广泛分布于皮层及海马的神经细胞及神经胶质细胞,对缺血较敏感的海马大锥体细胞亦有表达。, http://www.100md.com(马琳琳 刘 华 邢玉斌)