肠球菌基因分型及其与耐药性的研究进展(2)
1.3.2 RAPD引物、Mg2+ 浓度、Taq DNA聚合酶、循环参数 的反应条件优化在 50μl PCR反应体系中含被筛选的随机引物之一2μl(10pmol/L),10×buffer5μl dNTP0. 4μl(0.2mmol/L),Mg2+浓度1.5、2.0、2.5、3.0、4.0mmol/L,Taq DNA溶酶1.5U 、2.0U、2.5U、3.0U,DNA模板5.0μl循环参数94℃预变性3min后,再经94℃1min,35 ℃1min,72 ℃2min各35、40、45、50个循环后72℃延伸5min,取5μl扩增产物加上2μl上样6×buffer ,经1.5%琼脂糖凝胶(内含0.5μg/ml EB染料)电泳,85～100V电泳1h,同时用DNA marker 作标准,紫外分析仪下观察并拍照,进行RAPD结果比较,观察RAPD分型指纹图,确定RAPD分 型技术的优化条件反应体系。循环参数为94℃预变性,再经94℃1min、35℃1min、72℃2min 、45个循环后经72℃延伸5min。随机6株不同DNA指纹的样本在优化反应体系下重复检测3次 ,观察DNA指纹图谱。2 结果
2.1 RAPD反应体系的优化
2.1.1 随机引物的筛选 每次RAPD分析加入6条随机引物之一, 结果显示引物AW96628,序列3为5′-GGAGGGT-GTT-3′和引物AW96627,序列2为5′-TCACGCT GCA-3′均能对肠球菌产生特征RAPD谱型,而引物AW96628产生的RAPD指纹图谱,扩增条带最 清晰,分辩率最高,为最佳引物,其它4条引物菌株出现RAPD指纹图谱,条带少,不够清晰 ,没有长、中、短片段分布 ......
您现在查看是摘要页，全文长 5032 字符。