人NSD2基因特异性shRNA慢病毒载体构建及沉默效果评价(2)
(4)转染48小时后将含有病毒颗粒的细胞培养基上清液转移至新的15ml无菌离心管,再在细胞培养皿中加入3ml新鲜培养基继续培养。(5)24h后再次收取细胞培养基上清,与前次收取的含有病毒颗粒的细胞培养基合并,室温下2000rpm,离心5min,用滤器过滤上清液到新无菌管中。
1.2.4.2 用慢病毒侵染细胞 (1)将待侵染的细胞传代至3.5cm细胞培养皿中,当细胞贴壁时,吸弃细胞培养基。并将病毒悬液滴加在细胞表面,加入0.5ul 10mg/ml polybrene后混匀,37℃恒温箱培养。 (2)侵染8小时后吸弃细胞培养皿中的液体,加入2ml新鲜的细胞培养基继续培养。 (3)在细胞生长为80%,将细胞传代至6cm细胞培养皿。细胞生长到80%细胞培养皿时,继续传代。
(4)24小时后,用加相应抗生素的培养基換液,大约7天后,存活下来的即为被慢病毒成功侵染的细胞 ......
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