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编号:13308961
人NSD2基因特异性shRNA慢病毒载体构建及沉默效果评价(1)
http://www.100md.com 2018年4月1日 《现代养生·下半月》 2018年第4期
     【摘要】目的:构建针对人NSD2基因的shRNA慢病毒载体,并观察其在人肾293T细胞中沉默效果,从而为进一步研究NSD2基因在其他肿瘤细胞系中的表达及影响莫定基础。方法:以NSD2基因为靶标,设计并合成2条互补寡核苷酸序列(NSD2 shRNA-1,NSD2 shRNA-2)克隆至PLKO-βuro重组慢病毒载体中,形成新的重组慢病毒载体PLKO- NSD2-puroe然后与包装质粒PMDL、PV5VG、PREV在 293T细胞中进行包装,产生重组慢病毒颗粒,并进一步感染293T细胞,通过提取蛋白进行Western Blot检测NSD2基因沉默效果。结果:通过PCR鉴定和DNA测序鉴定证明NSD2 shRNA-1,NSD2 shRNA-2重组shRNA慢病毒表达质粒中插入了目的DNA片段。且通过Western Blot检测NSD2基因沉默效果,证明了NSD2 shRNA构建效果不错,可以进一步运用于与NSD2相关的肿瘤细胞细胞系中。结论:成功构建了人的NSD2基因shRNA真核表达的慢病毒载体,为进一步应用于其他与NSD2相关的癌细胞系 ......
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