2.4 观察指标

    2.4.1 ELISA法测定血清IL-1β，IL-6，TNF-α含量

    灌胃治疗31d后，断头处死大鼠取血，腹腔静脉穿刺取得血液标本后以4 000 r.mm_1离心，取血清部分，按说明书操作采用ELISA法测定血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。

    2.4.2 Westem blot法检测滑膜组织IL - 17，RORγt，Foxp3的蛋白表达水平

    处死大鼠后，取下大鼠踝关节滑膜组织，裂解后提取总蛋白，BCA法检测蛋白含量，上样量为30μg/孔，PCR仪100℃变性5min，获得蛋白样本，进行SDS-PAGE凝胶电泳，电压80V电泳30 min，待Marker条带跑出后，将电压调成120 V继续电泳90 min，见溴酚蓝到达理想位置时中止电泳，将凝胶电转至PVDF膜上，以5%脱脂奶粉溶液37℃封闭2h，加一抗4℃孵育过夜。TBST洗涤5minx3次，加二抗，37℃孵育1h，再次洗膜，ECL发光显影，成像，获取条带图像，用QuantityOne软件进行蛋白条带灰度分析。以p-actin作为内参对照，求出蛋白相对表达量，每个样本重复3次。

    2.4.3 数据统计

    应用SPSS 22.0软件统计分析 ......