细胞周期依赖的蛋白激酶抑制剂Ｏｌｏｍｏｕｃｉｎｅ对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖表达的影响
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【摘要】目的探讨细胞周期抑制剂Olomoucine对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)表达的影响及意义。方法建立大鼠脊髓半切损伤模型，随机分为假手术组、损伤对照组和Olomoucine干预组，采用免疫印迹分析脊髓损伤后CSPGs的表达；应用免疫荧光技术检测损伤区域胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和CSPGs的表达；采用改良Gale联合评分法对大鼠瘫痪后肢进行运动功能评估。结果脊髓损伤后星形胶质细胞明显活化增殖，GFAP和CSPGs的表达显著高于假手术组(P<0.05)，010moucine干预可有效下调GFAP和CSPGs的表达 (P
【关键词】脊髓损伤；细胞周期；胶质瘢痕；硫酸软骨素蛋白多糖
脊髓损伤(Spinal cord injury，SCI)后胶质细胞过度活化增殖、胶质瘢痕的形成以及以硫酸软骨素蛋白多糖(chondroitin sulphate proteoglycans，CSPGs)为主的大量抑制性因子均严重影响了轴突的再生。给予细胞周期素依赖的蛋白激酶(cyclindependent proteinkinases，CDKs)抑制剂Olomoucine调控细胞周期可有效抑制星形胶质细胞的有丝分裂从而抑制其过度活化、增殖[1]。本研究采用免疫荧光技术和免疫印迹等方法，检测Olomoucine对脊髓损伤后胶质瘢痕形成和CSPGs表达的影响，探讨其对脊髓损伤后大鼠瘫痪后肢运动功能恢复的作用及其可能机制。
1材料与方法
1.1动物分组及模型制备
健康SD大鼠30只，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，雌雄不限，体重200～250g。随机分为假手术约、损伤对照组和损伤干预组，每组各10只。脊髓半切损伤模型制备参照Tuszynski[2]的方法进行。术后给予抗生素，必要时补液，每日膀胱按摩2次至其排尿反射恢复为止。损伤干预组在脊髓损伤后30 min、24 h分别腹腔注射olomoucine (Sigma，4 mg/kg，用DMSO溶解)；损伤对照组和假手术组在相应时间点腹腔注射等量的DMSO。
1.2Western印迹
于术后4周时各实验组大鼠(每组5只)在麻醉状态下快速剥取损伤节段脊髓组织 ......
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