对氧磷脂酶－1基因多态性与脑梗死的相关性研究(1)
[摘要]目的 探讨福建地区汉族人群动脉硬化性脑梗死患者血清对氧磷脂酶-1(PON-1)活性及其基因多态性与脑梗死的关系。方法把研究对象分为脑梗死组和对照组，用分光光度法检测这两组研究对象血清对氧磷脂酶-l(PON-1)活性，同时检测血浆氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的变化，并把这些指标与PON-1的活性作相关分析。采用聚合酶链反应，限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测PON-1 192RR与55LL基因的多态性，用Logistic回归分析脑梗死组及对照组的基因型与其他危险因素的相关性。数据采用t检验及Y2检验。结果脑梗死组和对照组的PON-1活性均在已报道的中国人正常范围内，与对照组相比，脑梗死组血清PON-1活性明显降低(t=2.2142，P2=5.74)，而PON-155基因的多态性在两组间差异无统计学意义(78.13%w 76.78%，P=0.29，x2=1.1)。分析还表明PON-1192RR基因型的PON-1活性低于其它PON-1基因型，差异有统计学意义(P2，20mmol/L的Tris—HCI，pH 8.0)，立即摇匀，采用北京瑞利分析仪器公司的紫外分光光度仪，利用动力学测量，于25℃下以波长270 nm测定3 min内吸光度的变化率，酚乙酸酯的E270为1310 mol/cm，PON-1酶活性单位定义为1 u，相当于1 ml血清在25℃、270 nm的条件下，1 min水解1肚mol酚乙酸酯底物。
1.2.3 PON-1的192与55基因位点的多态性检测方法常规方法提取外周血白细胞DNA，以100 ngDNA为模板在总容积为25μl内，置于PE9600热循环仪(美国PE公司产)中进行PCR反应，PON-1的192/55基因检测的引物，根据文献[6]报道的引物序列委托上海生工公司合成。
PCR反应参数为：94℃3 min后，按94℃60s，60℃60 s，72℃60 s，反复循环35次，最后72℃延伸7 min，结束PCR反应。各取PON-1的192和55PCR产物分别用相应的10-15 u内切酶(NewEngland BioLabs公司的酶Alw I和NlaⅢ酶)，按照操作说明书进行酶切反应，消化后用2%琼脂糖(AMRESC0公司)凝胶电泳。284 bp的PON-1 192PCR产物酶切出现192和92 bp判定为RR纯合型，出现284 bp判定为QQ纯合型，284、192和92 bp判定为RQ杂合型；170 bp的PON-1 55 PER产物酶切后仍然为170bp判定为IL纯合型，170 bp酶切出现126和44bp判定为MM纯合型，同时出现170、126和44 bp判定为LM杂合型。
1.3统计学方法
计量资料以均数±标准差(x±s)表示，两组间均数的比较采用成组t检验；计数资料行x2。检验。PON-1与OX-LDL之间的线性关系行直线相关分析。基因型与危险因素间关系用Logistic回归分析进行分析处理。所有数据均采用SPSS 11.0统计软件计算完成，以P0.05)，。而作为脑梗死的独立危险因素的高血压在两组问是又差别的。与对照组相比，两组受
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1.2.3 PON-1的192与55基因位点的多态性检测方法常规方法提取外周血白细胞DNA，以100 ngDNA为模板在总容积为25μl内，置于PE9600热循环仪(美国PE公司产)中进行PCR反应，PON-1的192/55基因检测的引物，根据文献[6]报道的引物序列委托上海生工公司合成。
PCR反应参数为：94℃3 min后，按94℃60s，60℃60 s，72℃60 s，反复循环35次，最后72℃延伸7 min，结束PCR反应。各取PON-1的192和55PCR产物分别用相应的10-15 u内切酶(NewEngland BioLabs公司的酶Alw I和NlaⅢ酶)，按照操作说明书进行酶切反应，消化后用2%琼脂糖(AMRESC0公司)凝胶电泳。284 bp的PON-1 192PCR产物酶切出现192和92 bp判定为RR纯合型，出现284 bp判定为QQ纯合型，284、192和92 bp判定为RQ杂合型；170 bp的PON-1 55 PER产物酶切后仍然为170bp判定为IL纯合型，170 bp酶切出现126和44bp判定为MM纯合型，同时出现170、126和44 bp判定为LM杂合型。
1.3统计学方法
计量资料以均数±标准差(x±s)表示，两组间均数的比较采用成组t检验；计数资料行x2。检验。PON-1与OX-LDL之间的线性关系行直线相关分析。基因型与危险因素间关系用Logistic回归分析进行分析处理。所有数据均采用SPSS 11.0统计软件计算完成，以P0.05)，。而作为脑梗死的独立危险因素的高血压在两组问是又差别的。与对照组相比，两组受
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