血管紧张素转换酶基因235ＯＧ－Ａ单核苷酸多态性与心肌梗死的相关性研究(1)
 |
 |
[摘要]目的 研究血管紧张素转换酶(AcE)基因2350G-A单核苷酸多态性与心肌梗死(MI)的相关性。方法选择84例MI患者及年龄、性别相匹配的135例正常对照组，聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测AcE基因型。比较两组基因型及等位基因频率分布以及各基因型对临床参数的影响。结果 MI组AA基因型频率(26.19%)明显高于对照组(14.81%)(P=0.0376)，而GG基因型频率(38.10%)明显低于对照组(56.30%)(P=0.0088)；与对照组相比，MI组A等位基因频率(44.05%)明显升高，G等位基因频率(55.95%)明显降低(P=0.016)；无论是MI组还是对照组均未发现ACE基因型对血脂、载脂蛋白、高敏c反应蛋白以及可溶性cD40配体水平有影响。结论ACE基因2350G-A单核苷酸多态性与心肌梗死相关，AA基因型及A等位基因可能是心肌梗死的遗传易患因子，并且这种遗传相关性与血脂及急性冠脉综合征标志物水平无关。
[关键词]血管紧张素转换酶；基因；单核苷酸多态性；心肌梗死；聚合酶链反应
, 百拇医药
血管紧张素转换酶(angiotensin convertingenzyme，ACE)可能是心肌梗死(myocarflialinfarction，MI)的候选基因。研究显示，ACE基因16内含子287 bp的Alu序列的插入/缺失(insertion/deletion，I/D)多态性与心肌梗死相关，DD基因型及D等位基因是心肌梗死的遗传易患因子一般认为，ACE基因I/D多态性是通过影响血浆ACE水平进而影响MI发病。而个体问血浆ACE水平与ACE基因I/D多态密切相关。2000年，Levy等。通过全基因组扫描技术发现了13个新的单核甘酸多态性位点。其中，2350G-A多态性与血浆ACE水平最为密切。为探讨该多态位点与中国人群心肌梗死的相关性，笔者进行了病例一对照研究。
1 资料与方法
1.1 研究对象
选择2003年2月至2005年2月在本院心内科及监护病房的住院急性心肌梗死(AMI)患者84例，AMI的诊断根据WHO标准：持续典型的胸痛30 min以上，典型心电图动态变化，心肌酶动态变化；具有以上任何两项者。并排除先天性心脏病、心肌病、瓣膜病以及合并肾病、肝病患者。选择同期门诊健康体检者135例为对照组，经询问病史、实验室检查以及心电图检查无冠心病、高血压病、糖尿病，并排除肝、肾、内分泌等影响血脂代谢的全身性疾病以及心脑血管疾病。所有研究对象均为无血缘关系的汉族人。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 ACE基因2350G-A多态性检测 取EDTA-Na2抗凝外周静脉血，红细胞裂解液裂解后分离得到白细胞，改良KI法抽提DNA。PCR引物参照Zhu等的报道设计，上、下游引物序列分别为：5-CTGACGAATGTGATGGCCGC-3 和 5-TTGATGAGTTCCACGTATTTCG-3。上游引物的3端引入一个错配碱基，从而产生BstUl酶切位点。PCR反应体系为25μl，含基因组DNA 200 ng，dNTPs各0.06pmol，引物各4 pmol，10*buffer 2.5μl，MgCl2 1.75mmol/L，TaqDNA聚合酶1.5 u(华美公司，上海，中国)。经95℃5 min预变性后，94℃30 s，58℃30 s，72℃30 s共35个循环，最后72℃延伸10nlin。限制性酶切反应在20μl体系中进行，含PCR反应产物17.5 fll，BstUl限制性内切酶5U(Promega，Madison，USA)。3%琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物，紫外灯下观察结果。
, http://www.100md.com
1.2.2生化指标检测 血浆总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及甘油二酯(TG)的检测用标准酶比色法(Randox，UK)，载脂蛋白AI(ApoAI)及载脂蛋白B(ApoB)用免疫比浊法(明华公司，上海，中国)，血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)用乳胶凝集法(上海生物制品研究所，上海，中国)。检测由AU 1000全自动生化仪(Olympus，Tokyo，Japan)完成。酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清可溶性CD40配体(sCD40L)水平，试剂购自奥地利Bender MedSystems公司。
1.3统计学分析
基因频率用基因计数法计算，研究对象与Hardy-Weinberg平衡的符合程度用x2检验，组间基因型及等位基因频率比较用x2检验；组间均数比较用检验或方差分析；相对风险率以比数比(oddsratio，OR)及其95%可信区间(confidence interval，CI)表示。数据处理由SAS 8.0计算机软件完成，以P
, http://www.100md.com
2.2两组基因型及等位基因频率比较
两组基因型及等位基因频率见表2。经过x2检验，AMI组及对照组均达到Hardy-Weinberg平衡(P分别为0.1680和0.0606)，具群体代表性。两组间基因型构成比差异具有统计学意义(P=0.0209)。AMI组A等位基因频率显著高于对照组，而G基因型频率则显著低于对照组(P=0.0016)。AA基因型的AMI危险度是GG基因型的2.04倍(P=0.0376)。尽管两组间GA基因型频率差异无统计学意义(P=0.2904)，但由于AMI组GG基因型频率显著低于对照组，因而GA+AA基因型的AMI危险度是GG基因型的2.09倍(P=0.0088)。见表3。
2.3 AGE基因型与临床参数的关系
无论是AMI组还是对照组，均未能发现ACE三种基因型与TC、LDL-C、HDL-C、TG、ApoAI、ApoB以及sCD40L、hs-CRP间有相关性(P>0.05)。
3 讨论
在过去的十余年中，对有关ACE基因UD多态性与MI的关系进行了大量的研究。Cambien等。首先报道了DD基因型与MI危险度升高有关，即使在低危险度的亚组中也是如此，但其后的一些研究结果则不尽一致。
ACE是一种二肽羧肽酶，其水解血管紧张素I
[ 下 页 ], 百拇医药(潘 闽)