络脉舒通对兔心肌梗死再灌流损伤保护作用的实验研究(2)
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1.3 生化指标检测方法
再灌注后2 h抽取静脉血2 ml，以3000 r/min离心15 min，提取上清液，检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)和肌酸激酶(creatine kinase，CK)活性。实验结束时取梗死区心肌组织0.1 g制成10%的组织匀浆，应用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定心肌MDA含量nmol/mgprot，应用催化L-Arg法测定NOS活力U/mgprot，应用黄嘌呤氧化酶比色法测定心肌SOD活性U/mgprot。
1.4 心肌梗死范围测量
再灌注2 h后再次阻断冠状动脉血流，注射20 ml 20%Evans蓝进入左心室进行心肌染色，以区分缺血(无蓝色)和非缺血组织(蓝色)。迅速取出心脏将左室心肌垂直于纵轴切成约2 mm的薄片，将心肌薄片以滤纸吸干，结果非缺血区心肌呈蓝色，缺血区不显色，将整个心肌切片置于1% TTC磷酸缓冲液(pH 7.4)内，37 ℃孵箱中孵育15 min，梗死区心肌呈灰白色，非梗死区心肌呈深红色。采用图像分析仪测定心肌梗死面积(infarction area，I)及心室面积(left ventriculararea，LV)，并计算两者比值(I/LV)，估测梗死心肌范围。
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1.5 统计学方法
应用SPSS 11.0统计学软件进行处理。资料以均数±标准差(x±s)表示，同组间比较用配对t检验，多组间比较用方差分析及q检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 缺血-再灌流后2 h各组血流动力学指标
假手术组各压力参数较稳定，对照组较假手术组LVSP和±dp/dtmax均显著下降(P<0.05＝，LVEDP则显升高(P<0.05＝；络脉舒通组与对照组相比，LVSP和±dp/dtmax均显著升高(P<0.05＝，LVEDP则明显下降(P<0.05＝，见表1。
2.2 各组再灌流后2 h MDA、SOD、NOS含量
变化及心肌梗死面积比较
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与假手术组相比，络脉舒通组和对照组MDA显著升高(P
3 讨论
再灌流损伤指在心肌缺血基础上恢复血流后心肌组织损伤反而加重，甚至发生不可逆损伤的现象。它是由于氧自由基的释放、炎性细胞因子的合成与释放、中性粒细胞和巨噬细胞的趋化作用、蛋白激酶的激活等，从而导致心脏功能障碍[2]。心肌缺血时，由于心肌内源性氧自由基清除剂减少，氧自由基大量堆积，再灌流后，氧自由基水平急剧上升，导致心肌损伤加重。络脉舒通是在中医络病理论指导下的通络方剂，主要成分为黄连、天竺黄、川芎、水蛭、地龙等，具有活血通络，祛风止痛的功效。
本研究通过结扎兔冠状动脉致局灶性心肌缺血坏死，建立兔AMI再灌注模型。结果显示，与对照组相比，络脉舒通组在再灌流后2 h，LVSP和±dp/dtmax显著升高(P[12]。通常情况下，机体通过多种途径产生氧自由基，后者能攻击生物膜中不饱和脂肪酸引发脂质过氧化作用，形成脂质过氧化物，如MDA、酮基及新的氧自由基等，引起细胞损伤。因此，MDA的含量可反映心肌脂质过氧化程度，间接反映心肌细胞受损程度。NOS催化L-精氨酸合成NO，在心肌缺血-再灌流时，由于能量缺乏、钙超载、氧自由基大量形成以及脂质过氧化反应，使NOS的活性受到抑制，故NOS可反映血管内皮细胞受损的程度[13-15]。SOD是需氧生物体内的一种酶蛋白，具有催化超氧自由基的岐化作用，对机体起保护作用，其活性的高低间接反映机体清除氧自由基的能力。心肌缺血-再灌流损伤后心肌SOD活性下降，而心肌MDA含量则升高。本研究发现络脉舒通组SOD含量升高，MDA降低，这一结果提示络脉舒通能够减轻急性心肌缺血引起的细胞损伤。
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总之，本研究结果表明络脉舒通通过抗氧化、清除氧自由基，对再灌流损伤心肌有显著的保护作用，有助于心功能的改善，从而为临床AMI的中药治疗提供了科学依据。
参考文献
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