糖原合成酶激酶-3β介导心肌营养素-1对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的作用
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[摘要]目的研究心肌营养素-1(CT-1)对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的作用及信号通路。方法本研究在江西省分子医学重点实验室完成。用改良的方法培养出生1～3d的Sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌细胞，根据实验要求分为5组：(1)对照组；(2)缺氧复氧组；(3)缺氧复氧组+CT-1组；(4)缺氧复氧组+CT-1+LY294002组(PIK3/Akt阻断剂)；(5)缺氧复氧组+CF-1+助溶剂DMSO组。CT-1的质量浓度为10ng/mL，缺氧3h，复氧3h。MTS法测定心肌细胞的存活率，四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位(△ψm)，二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH CA)检测细胞活性氧(ROS)，流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。心肌细胞磷酸化糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和P13K蛋白检测用western blotting。以方差分析及q检验进行统计学分析。结果缺氧复氧培养后心肌细胞凋亡率及细胞内ROs较对照组明显增加，而心肌细胞存活率显著降低，线粒体膜电位(△Xψm)下降[(40.55+4.25)vs.(86.28±7.15)，P<0.01]；磷酸化的GSK-3β和PI3K蛋白稍有增加。而CT-1处理的心肌细胞，较缺氧复氧组心肌细胞存活率明显上升(87%)，心肌细胞凋亡率及细胞内ROS显著减少，△ψm水平增加，磷酸化GSK-3β及P13K蛋白水平明显增加。CT-1的作用能被PIK3/Akt阻断剂LY294002抑制，而助溶剂组则未观察到类似作用。结论 CT-1能保护缺氧复氧损伤的心肌细胞，且其作用依赖P13K/GSK-3β信号通路的激活。
[关键词]心肌细胞；损伤；心肌营养素-1；糖原合成酶激酶-3β；信号通路
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