1.7 western印迹技术检测肾组织中MMP-9

    及Ⅳ型胶原的蛋白水平 应用western印迹技术检测肾组织中MMP-9及Ⅳ型胶原的蛋白表达。组织块用冷TBS洗涤2～3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。加入10倍组织体积组织裂解液体，提取组织总蛋白溶液， 采用Bradford方法进行蛋白定量。制备分离胶进行电泳，每孔加入蛋白含量约20 μg，8%质量浓度的SDS-PAGE电泳后PVDF转膜。5%脱脂奶室温封闭1 h后加入一抗(1∶ 200稀释)，4℃摇床过夜，用TBST室温下脱色摇床下洗涤3次，再加入生物素标记的二抗(1∶ 3000)，摇床常温孵育1 h , TBST洗涤，ECL发光，X线底片曝光, 显影及定影, 条带的灰度值以β-actin作为内参。对电泳条带扫描及图像分析，重复3次后得出条带的平均吸光度(A)分析。

    1.8 统计学方法

    所有数据采用SPSS 17.0软件包进行统计分析，计量数据用均数±标准差(x±s)表示，先进行数据的正态分布检验(Kolmogorov-Smirnov)，方差齐性检验，组间比较采用单因素方差分析(SNK-q法)，以P<0.05为差异具有统计学意义。

    2 结果

    2.1 各组大鼠基本情况

    对照组大鼠无死亡，MODS模型组12 h死亡2只，24 h死亡3只，48 h死亡1只。对照组活动如常 ......