激活自噬减轻心肺复苏后Wistar大鼠脑损伤(3)

http://www.100md.com 2013年12月1日 中华急诊医学杂志2013年第12期

     实验二中ROSC后2 h 和4 h处死动物，迅速取脑，用眼科剪取顶叶皮层区2.0 mm×0.5 mm×0.5 mm 小块组织，1% 锇酸4 ℃冰箱中固定1～2 h。将标本进行漂洗、固定、脱水、浸透、包埋、切片、染色后于电镜下观察并拍片， 每张切片不同部位各选取10个神经元细胞，每个神经元细胞随机选取3个视野，在16 500倍视野下观察并计数每个神经元细胞胞浆内自噬泡数量。

    1.6NDS神经功能评分

    NDS评分内容包括意识状态、呼吸、颅神经功能、运动感觉功能和行为5个部分，范围为0～500，0～100为正常，500为死亡。ROSC后24、48和72 h分别由3个不同的医生进行评分，3人的平均分为最终评分。

    1.7TUNEL染色

    TUNEL凋亡试剂盒购自ROCHE公司(瑞士)。具体步骤如下：①取ROSC后72 h海马组织石蜡切片，常规脱蜡至水；②用蛋白酶K室温孵育30 min，PBS洗片后与0.3%的H2O2甲醇溶液室温孵育30 min ......