1.6 Western blot检测p38 MAPK的磷酸化水平

    细胞分为对照组、缺氧组及HS组，缺氧组及HS组又分别分为4个亚组：30 min，1 h，2 h，4 h。缺氧至相应时间点后使用蛋白提取试剂盒提取蛋白，蛋白定量配平后上样电泳，根据溴芬蓝指示剂及蛋白marker的位置来确定电泳时间，根据蛋白相对分子质量大小确定转膜时间及电流大小，转膜成功后于5%脱脂奶粉室温封闭2 h，再于4 ℃冰箱孵育Phos-p38抗体(1：1000)过夜。次日取出在TBST漂洗后于4 ℃冰箱孵育羊抗小鼠二抗(1：3500)1 h，TBST洗膜后在暗室中加入预混好的ECL发光液，压片，曝光。各蛋白条带的信号强度用FluorChem 8900 灰度分析软件进行分析。

    1.7 统计学方法

    所有数据均使用SPSS 13.0统计学分析软件分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示；ELISA及Western blot数据在多组间比较时采用one-way ANOVA 方差分析，两两比较采用LSD-t检验方法分析 ......