1.6 LC3B表达测定

    采用Western blot法测定：用蛋白裂解液RIPA(中)(货号：P0013C，碧云天生物技术研究所)在玻璃匀浆器中裂解冻存组织，高速离心后得上清蛋白溶液。采用BCA蛋白含量测定试剂盒(货号：P0010S，碧云天生物技术研究所)测定蛋白浓度；然后，用SDS-PAGE(货号：P0012A，碧云天生物技术研究所)制备12%的分离胶和6%浓缩胶。加样后恒压100V电泳，电泳结束后转PVDF膜，转膜后加一抗(anti-LC3B 1∶1000；anti-GAPDH 1∶800)；过夜后加二抗(second anti-LC3B 1∶3000；second anti-GAPDH 1∶4000)。孵育后将膜包好进入暗室压片并洗片，使用凝胶成像分析系统对胶片进行扫描分析，以特定的目标蛋白条带OD值(volume)与内参蛋白GAPDH(volume)比值表示LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达水平。

    1.7 透射电镜标本制作

    将左侧海马剩余1/3新鲜组织块用手术刀片切成1 mm3大小 ......