1.6小肠微循环内皮糖萼层破坏的机制研究

    采用免疫组化的方法检测小肠微循环内皮细胞phospho-p65NF-κB的表达。选取10μm厚的小肠石蜡切片脱蜡至水，0.3g/LH2O2甲醇溶剂室温作用30min，滴加山羊封闭血清1h后分别滴加鼠抗p-p65NF-κB抗体(CellSignalingTechnology，Beverly，MA)一抗37℃1h，加生物素化山羊抗兔IgG二抗37℃20min，DAKO法染色，DAB显色，苏木精-伊红复染，脱水，透明封片后光镜下观察(OlympusIPP6.0;Tokyo，Japan)。高倍镜下(×40)，每张切片观察10个非重复视野，结合染色强度(0～3分分别代表染色强度由低到高)及阳性细胞比例(0～4分分别代表0%～70%以上的阳性细胞比例)两项评分作为半定量评估方法^[11]，所有切片均由两名实验员进行双盲评分。

    每组大鼠的外周血及肠系膜上静脉血均被收集，并采用ELISA法检测TNF-α(QuantikineELISAKit ......