实时荧光定量RT—PCR内参基因的选择(1)
【摘 要】 实时荧光定量RT-PCR是在PCR反应体系中加入荧光化学基团，并通过实时荧光定量PCR仪，进行实时、自动检测整个PCR扩增过程中的荧光信号，从而对扩增产物进行实时定量分析的方法。它具有高灵敏、高通量、定量准确、可重复、污染少等优点，被广泛应用于基因诊断，病毒筛选，细胞和组织中RNA的定量等。在采用RT-PCR进行研究的过程中，我们通常需要加入内参基因作为参考，内参基因又称为管家基因，它主要是用来平衡样本之间浓度和纯度的差异，减少实验误差，使得实验结果更加准确，所以内参基因的选择尤为重要。
【关键词】 实时 荧光定量RT-PCR 内参基因
1 理想内参基因的选择
理想的内参基因应该满足以下条件：①不存在假基因(pseudogene)， 以避免基因组 DNA的扩增；②高度或中度表达， 排除太高或低表达；③稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)， 而且其表达量是近似的，无显著性差别；④表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关；⑤其稳定的表达水平与目标基因相似；⑥不受任何内源性或外源性因素的影响 ......
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【关键词】 实时 荧光定量RT-PCR 内参基因
1 理想内参基因的选择
理想的内参基因应该满足以下条件：①不存在假基因(pseudogene)， 以避免基因组 DNA的扩增；②高度或中度表达， 排除太高或低表达；③稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)， 而且其表达量是近似的，无显著性差别；④表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关；⑤其稳定的表达水平与目标基因相似；⑥不受任何内源性或外源性因素的影响 ......
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