献血人群ABO亚型及血型不规则抗体调查研究(1)
【摘 要】 目的 研究本市献血人群ABO亚型分布及血型不规则抗体分布情况，为临床输血安全提供有效依据。 方法 应用全自动血型分析仪对济宁市中心血站2013～2015年413344份血液标本进行ABO血型鉴定，对ABO正反定性不符及不规则抗体阳性的标本送血型参比实验室通过试管法正反定性、吸收放散及血浆抗体筛查等试验进行分析，总结。 结果 178份复检标本中共检出血型亚型45份(25.3%)及不规则抗体93份(52.2%)，最常见亚型为A2B型(10例，22.2%)，占人群总数的0.0024%，其他亚型(35例，77.8%)占人群总数的0.0085%。血型不规则抗体中出现不规则抗-A、抗-B及抗-M等抗体，其中抗-M比例最高，占38.71%。 结论 济宁地区ABO亚型中A亚B型最多，其次为AB亚型，B亚型多于A亚型，亚型中产生的抗-A抗体比例明显多于抗-B抗体，献血人群中抗-M抗体的比例较高，这提示在临床输血中需加强对亚型及MNSs血型系统的重视。
【关键词】 献血人群 ABO血型 亚型 不规则抗体
输血是临床救治的重要手段之一，输血前的血型检查及血型配型对患者至关重要。但是，血型具有复杂的血型系统，除常见ABO血型外，ABO系统还有一定比例的亚型，血型亚型的准确鉴定及准确的输血前配型，对输血患安全具有十分重要的意义[1，2]。ABO亚型是指 人类常见的四种血型下再进行进一步细分出的ABO血型，亚型常常会对血型鉴定造成干扰[3]。为进一步了解ABO亚型及血型不规则抗体在无偿献血人群中的分布规律，为临床输血患者提供合适的供血者血液，保障输血安全，本研究对我市2013～2015年度鉴定出的血型亚型及血型不规则抗体阳性案例进行分析总结。
1 材料与方法
1.1 标本来源 本站2013～2015年无偿献血者中通过血型自动化系统检出的正反定型不符或凝集明显较弱的标本以及O细胞凝集的标本，共178例。
1.2 试剂及设备 试剂盒来源如下：抗-A、抗-B血清，人ABO反定型试剂A1、B、O细胞，红细胞血型抗体鉴定谱细胞，直接抗人球蛋白试剂IgG/C3d，抗-A1/抗-H抗体(以上均为上海血液生物医药有限责任公司试剂)；抗体筛选红细胞(Sanquin)；抗-AB抗体(Diagast)；低离子抗人球蛋白卡(Bio-Rad)；微柱凝胶卡检测系统(达亚美)；恒温水浴箱；观片灯；久保田离心机。
1.3 方法 血型参比实验室对经血型自动化检测后送检的标本通过ABO正反定型、抗-A1/抗 –AB/抗—H血清试验、吸收放散试验 、唾液型物质测定、抗球蛋白抗体试验、抗体筛查试验、抗体鉴定试验等进行血清学鉴定，必要时进行分子生物学分析。ABO亚型及不规则抗体的分类，按文献[4]标准判断。
1.3.1 正反定型试验
正定型：取2滴抗-A、抗-B血清分别加入3%～5%红细胞悬液1滴，混匀，3500r/min离心15s，观察结果。
反定型：取2滴被检标本血清加入3%～5%标准红细胞悬液1滴，混匀，3500r/mi n离心15s，观察结果。
1.3.2 吸收放散试验
取1ml被检标本压积红细胞用生理盐水洗涤3次，将红细胞沉淀上的盐水去掉，加入1ml相应的抗血清(抗-A或抗-B)，充分混匀后，置于4℃冰箱吸收2h以上，每15min摇匀一次，然后用4℃冷盐水洗涤5～6次，直至最后一次洗涤液经检测相应抗血清效价为0时，将洗净的红细胞取出置洁净的试管中，加入半量0.9%生理盐水，56℃水浴震荡箱中放散10min后，离心5min(3500r/min)，取放散液加入相应的标准红细胞悬液1滴，并以O型标准红细胞反应做对照，观察结果。
1.3.3 抗体鉴定试验
盐水法：取洁净小试管10支，分别加入被检标本血浆2滴(100μl)；然后分别加入1～10号谱细胞试剂各1滴(50μl)；混匀，以3400r/min离心15s，立即肉眼观察凝集情况，必要时置4℃冰箱15min以上后再次离心观察结果，记录反应格局后进行结果判定。
抗球蛋白法：取洁净小试管10支，分别加入被检标本血浆2滴(100μl)；然后分别加入1～10号谱细胞试剂各1滴(50μl)；混匀后置37℃水浴30分钟，用生理盐水洗涤3次，3400r/min离心1分钟，最后一次扣干；加入抗人球蛋白(IgG/C3d)试剂1滴，混匀，以3400r/min离心15s，立即肉眼观察凝集情况，记录反应格局后进行结果判定。
1.3.4 统计学分析 统计结果采用SPSS13.0统计软件分析，对计数资料进行c2检验。
2 结果
413344份标本中有178份因正反定型不符(其中O细胞凝集95份)送检，其中共检出血型亚型45份(0.01%)及不规则抗体93份(0.02%)，最常见亚型为A2B型(10例，22.2%)。济宁地区献血人群ABO亚型检出情况见表1，在检出的ABO亚型中，以A亚B型最多(31.1%)，其次为AB亚型(24.4%)，B亚型(20.0%)多于A亚型(15.6%)，B(a)型为8.9%；血型不规则抗体检出情况见表2，其中不规则抗-A，抗-B抗体均为ABO亚型中所检出，抗-A抗体比例(25.81%)明显高于抗-B抗体(9.68%)，抗-M抗体比例最高(38.71%)，其他抗体较少见，非特异性冷抗体也有较高的检出率(18.28%)。
3 讨 论
临床上因ABO血型不合引起的输血安全问题通常较为严重， ABO血型系统中存在的部分亚型，通常对血型的鉴定造成一定干扰[3] 。ABO亚型是遗传基因所决定的弱表现型，由于其红细胞携带的A或B抗原数量少，与抗-A或抗-B反应较弱，某些情况下甚至不发生凝集，极易漏检而造成血型鉴定错误[5]。因此，ABO血型及亚型的正确鉴定是保证输血安全的重要前提。 (周贝贝)
【关键词】 献血人群 ABO血型 亚型 不规则抗体
输血是临床救治的重要手段之一，输血前的血型检查及血型配型对患者至关重要。但是，血型具有复杂的血型系统，除常见ABO血型外，ABO系统还有一定比例的亚型，血型亚型的准确鉴定及准确的输血前配型，对输血患安全具有十分重要的意义[1，2]。ABO亚型是指 人类常见的四种血型下再进行进一步细分出的ABO血型，亚型常常会对血型鉴定造成干扰[3]。为进一步了解ABO亚型及血型不规则抗体在无偿献血人群中的分布规律，为临床输血患者提供合适的供血者血液，保障输血安全，本研究对我市2013～2015年度鉴定出的血型亚型及血型不规则抗体阳性案例进行分析总结。
1 材料与方法
1.1 标本来源 本站2013～2015年无偿献血者中通过血型自动化系统检出的正反定型不符或凝集明显较弱的标本以及O细胞凝集的标本，共178例。
1.2 试剂及设备 试剂盒来源如下：抗-A、抗-B血清，人ABO反定型试剂A1、B、O细胞，红细胞血型抗体鉴定谱细胞，直接抗人球蛋白试剂IgG/C3d，抗-A1/抗-H抗体(以上均为上海血液生物医药有限责任公司试剂)；抗体筛选红细胞(Sanquin)；抗-AB抗体(Diagast)；低离子抗人球蛋白卡(Bio-Rad)；微柱凝胶卡检测系统(达亚美)；恒温水浴箱；观片灯；久保田离心机。
1.3 方法 血型参比实验室对经血型自动化检测后送检的标本通过ABO正反定型、抗-A1/抗 –AB/抗—H血清试验、吸收放散试验 、唾液型物质测定、抗球蛋白抗体试验、抗体筛查试验、抗体鉴定试验等进行血清学鉴定，必要时进行分子生物学分析。ABO亚型及不规则抗体的分类，按文献[4]标准判断。
1.3.1 正反定型试验
正定型：取2滴抗-A、抗-B血清分别加入3%～5%红细胞悬液1滴，混匀，3500r/min离心15s，观察结果。
反定型：取2滴被检标本血清加入3%～5%标准红细胞悬液1滴，混匀，3500r/mi n离心15s，观察结果。
1.3.2 吸收放散试验
取1ml被检标本压积红细胞用生理盐水洗涤3次，将红细胞沉淀上的盐水去掉，加入1ml相应的抗血清(抗-A或抗-B)，充分混匀后，置于4℃冰箱吸收2h以上，每15min摇匀一次，然后用4℃冷盐水洗涤5～6次，直至最后一次洗涤液经检测相应抗血清效价为0时，将洗净的红细胞取出置洁净的试管中，加入半量0.9%生理盐水，56℃水浴震荡箱中放散10min后，离心5min(3500r/min)，取放散液加入相应的标准红细胞悬液1滴，并以O型标准红细胞反应做对照，观察结果。
1.3.3 抗体鉴定试验
盐水法：取洁净小试管10支，分别加入被检标本血浆2滴(100μl)；然后分别加入1～10号谱细胞试剂各1滴(50μl)；混匀，以3400r/min离心15s，立即肉眼观察凝集情况，必要时置4℃冰箱15min以上后再次离心观察结果，记录反应格局后进行结果判定。
抗球蛋白法：取洁净小试管10支，分别加入被检标本血浆2滴(100μl)；然后分别加入1～10号谱细胞试剂各1滴(50μl)；混匀后置37℃水浴30分钟，用生理盐水洗涤3次，3400r/min离心1分钟，最后一次扣干；加入抗人球蛋白(IgG/C3d)试剂1滴，混匀，以3400r/min离心15s，立即肉眼观察凝集情况，记录反应格局后进行结果判定。
1.3.4 统计学分析 统计结果采用SPSS13.0统计软件分析，对计数资料进行c2检验。
2 结果
413344份标本中有178份因正反定型不符(其中O细胞凝集95份)送检，其中共检出血型亚型45份(0.01%)及不规则抗体93份(0.02%)，最常见亚型为A2B型(10例，22.2%)。济宁地区献血人群ABO亚型检出情况见表1，在检出的ABO亚型中，以A亚B型最多(31.1%)，其次为AB亚型(24.4%)，B亚型(20.0%)多于A亚型(15.6%)，B(a)型为8.9%；血型不规则抗体检出情况见表2，其中不规则抗-A，抗-B抗体均为ABO亚型中所检出，抗-A抗体比例(25.81%)明显高于抗-B抗体(9.68%)，抗-M抗体比例最高(38.71%)，其他抗体较少见，非特异性冷抗体也有较高的检出率(18.28%)。
3 讨 论
临床上因ABO血型不合引起的输血安全问题通常较为严重， ABO血型系统中存在的部分亚型，通常对血型的鉴定造成一定干扰[3] 。ABO亚型是遗传基因所决定的弱表现型，由于其红细胞携带的A或B抗原数量少，与抗-A或抗-B反应较弱，某些情况下甚至不发生凝集，极易漏检而造成血型鉴定错误[5]。因此，ABO血型及亚型的正确鉴定是保证输血安全的重要前提。 (周贝贝)