同型半胱氨酸硫内酯对ECV-304细胞凋亡及ROS生成的影响

http://www.100md.com 2005年6月1日 谷伟军　陆菊明　杨国庆　郭清华　母义明　潘长玉

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     【摘要】目的探讨同型半胱氨酸硫内酯(HcyT)对人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)的损伤作用及其可能机制。方法采用倒置显微镜、四唑盐(MTT)比色法及碘化吡啶(PI)染色流式细胞仪检测HcyT对细胞毒性作用，以荧光标记流式细胞仪检测细胞内反应性氧类(ROS)的生成。结果一定剂量HcyT刺激后，内皮细胞发生凋亡，且凋亡呈浓度时间依赖性。随着HcyT浓度的增加，ROS的生成逐渐增加。结论HcyT通过ROS呈时间浓度依赖性地 诱导内皮细胞凋亡，这可能是Hcy致血管病变的机制之一。

    【关键词】同型半胱氨酸硫内酯;ECV304细胞;凋亡;反应性氧类

    收稿日期：2005-01-06

    作者单位：100853北京市，解放军总医院内分泌科

    作者简介：谷伟军，女，1976年12月生，山西省大同市人，在读博士研究生 通讯作者：陆菊明，Tel:010-66939881

    同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是蛋氨酸代谢中间产物，众多研究表明高同型半胱氨酸是人类心血管疾病的独立危险因素。目前有一些Hcy致血管病变机制的研究，但其确切机制还不明了。近来有学者发现同型半胱氨酸硫内酯(homocysteinthiolactone,HcyT)，氨基酰tRNA合成酶在编辑反应中形成的Hcy反应产物，它可能是Hcy致血管损伤的原因之一。一些研究表明HcyT的形成主要取决于体内Hcy、蛋氨酸、叶酸等的含量[1]。HcyT可诱导人HL60细胞的凋亡，给狒狒缓慢灌注HcyT可诱发动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)[2]。本研究旨在通过观察HcyT对培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)毒性、凋亡及细胞内反应性氧类(reactive oxygen species,ROS)产生的影响，从而为Hcy致病机制研究提供新的思路。

    1材料与方法

    1.1主要试剂与仪器L-同型半胱氨酸硫内酯(homocysteine thiolactone hydrochloride salt,LHcyT)，2,7二氯二氢荧光素双醋酸盐(2′, 7′dichlorofluorescein diacetate,H2DCF)均为Sigma公司产品,3(4,5二甲基噻唑2)2,5二苯基四氮唑溴盐(MTT)为Gibco公司产品;其它试剂均为国外或国产分析纯试剂。ModelBB5060CO2培养箱：上海Heraeus公司；IMT2相差倒置显微镜：日本Olympus公司；FACSCalibur流式细胞仪:美国BD;酶标仪:美国BioRAD公司 ......

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