应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的下调基因(1)
【摘要】 目的 筛选与克隆乙型肝炎表面抗原大蛋白(LHBs)的下调基因，以阐明HBV感染相关性疾病的分子生物学机制。方法 应用常规分子生物学方法，克隆LHBs基因，构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)LHBs。将pcDNA3.1(-)LHBs与pCAT3promoter共转染肝癌细胞系HepG2，用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。分别以pcDNA3.1(-)LHBs以及pcDNA3.1(-)转染HepG2细胞，提取mRNA并逆转录为cDNA，来源于pcDNA3.1(-)LHBs转染细胞的cDNA为驱动(driver)，来源于pcDNA3.1(-)的cDNA为测试(tester)，进行抑制性消减杂交分析，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆进行测序及同源性分析。结果 ①成功构建pcDNA
3.1(-)LHBs真核表达载体;②pcDNA3.1(-)LHBs与pCAT3promoter共转染HepG2细胞的CAT表达活性较对照组的活性明显下降(P, 百拇医药(纪 冬 成 军 郭 江 刘 妍 陈国凤 王 琳)
3.1(-)LHBs真核表达载体;②pcDNA3.1(-)LHBs与pCAT3promoter共转染HepG2细胞的CAT表达活性较对照组的活性明显下降(P, 百拇医药(纪 冬 成 军 郭 江 刘 妍 陈国凤 王 琳)