刘 军,甄 平,李旭升,李慎松,田 琦,常彦峰,高展望,张航向,陈 慧*

    (1兰州军区兰州总医院全军骨科中心,兰州 730050;2第四军医大学西京医院老年病科,西安 710032)

    骨性关节炎(osteoarthritis,OA)是以局部关节疼痛、肿胀、畸形为临床特征,致使患者活动能力受限的慢性关节软骨退行性病变[1],可导致软骨下骨质增生,进而严重影响日常工作和生活。其在>65岁的老年人中发病率日趋增高,据世界卫生组织(World Health Organization,WHO)报道,65～70岁的老年人OA的患病率接近62%,>70岁的人群中接近70%[2]。我国老龄化社会的快速到来将使我国成为世界上OA患病人数最多的国家之一。随着医疗技术的发展和全民医保的覆盖,OA患者的生活和生存状况更加受到重视。持续的软骨细胞凋亡、滑膜炎和骨破坏等致使OA患者病情进行性加重,面临的选择只有人工膝关节表面置换手术。

    Janus酪氨酸蛋白激酶/信号转导子和转录激活子蛋白(Janus activated tyrosine kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT)是近年来发现的重要的细胞内信号转导通路家族。JAK家族成员包括JAK1、JAK2、JAK3、和酪氨酸激酶2(tyrosine kinase 2,TYK2),主要存在于人体细胞质中,与同在细胞质中的STAT家族的7个成员(包括STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5A、STAT5B和STAT6)共同参与炎症反应、氧化应激、细胞损伤和凋亡等密切相关的重要通路[3]。

    本实验主要通过JAK2/STAT3信号通路与OA中软骨细胞凋亡的相关性以及其对软骨细胞线粒体抗氧化应激能力影响的研究,为临床中西医治疗OA提供新的思路和依据。

    1 材料与方法

    1.1 药品和试剂

    C57BL/6小鼠(雄性,10只,体质量10.25～15.70g,平均12.55g)由第四军医大学动物实验中心提供;还包括SC-39100(JAK2/STAT3通路激动剂)、二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)、胰蛋白酶(Sigma-Aldrich公司,美国);蛋白酶抑制剂、p-JAK2抗体、p-STAT3抗体、β-激动蛋白(β-actin)抗体(Santa Cruz公司,美国);下丘脑调节性多肽(hypothalamic regulatory peptides,HRP);羊抗小鼠、羊抗兔和兔抗羊IgG二抗(北京中杉金桥公司);改良Eagle培养基(Dulbecco’s modified eagle medium,DMEM)低糖培养液(Hyclone公司,美国);胎牛血清(fetal bovine serum,FBS,杭州四季青公司);无血清细胞冻存培养基(RPMI1640;Gibco公司,美国);RIPA蛋白质裂解液(Promab公司,美国);蛋白上样缓冲液(上海碧云天生物公司);线粒体提取盒(武汉博士德生物公司) ......