荧光定量ＰＣＲ检测Ｂ19病毒方法的建立

http://www.100md.com 2005年6月1日 赵国强 胡 军 冷 弘 王 岚 陈宗德

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     关键词 B19；荧光定量PCR；检测

    中图分类号 R373

    摘要 目的：建立采用荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)检测人微小病毒B19的方法。方法：根据B19病毒VP2基闲序列，设汁开合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的B19病毒VP2区基因片段克隆人pGEM-T载体，重组质粒pGEM—T—V1'2经筛选、鉴定后，作为阳性模板，用于标准曲线的制定和样品检测;对15例B19病毒感染血标本和几种其他病毒进行PCR测定。结果：应用重组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系；与定量对照曲线比较计算，15例B19病毒感染标本中B19拷贝数为4.8 x10⁵μl^-1～8.7 x10“p1—1；对其他几种病毒的扩增均无信号出现。结论：成功建立厂检测B19的荧光定量PCR方法，较常规PCR技术更为简便、快速、准确，有很好的应用前景和研究价值。

    http://www.100md.com/html/paper/1671-6825/2005/03/02.htm

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