冠心病患者血浆载脂蛋白Ｍ水平及其相关性研究
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参见附件(269KB，3页)。
[摘要]目的 监测冠心病患者血浆中载脂蛋白M(ApoM)的水平，了解ApoM与其他脂蛋白或载脂蛋白的关系。 方法 应用Dot.Blotting技术检测70例冠心病患者及85例健康志愿者血浆中ApoM的水平，酶法及比浊法检测冠心病患者血浆中载脂蛋白AI(ApoAI)、载脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白a(Lpa)、总三酸甘油酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL.C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL.C)以及空腹血糖(Glu);比较冠心病患者和健康志愿者血浆中ApoM的水平，对ApoM与其他脂蛋白的关系进行相关性分析。 结果 冠心病患者血浆中ApoM的水平为(3.355±0.1222)ODu·mm -2 ，明显高于健康志愿者(2.097±0.05988)ODu·mm -2 (P<0.01)，与ApoAI(r=-0.2423，P=0.0433)、LDL.C/ApoB(r=-0.2481，P=0.0383)、LDL.C(r=-0.2608，P=0.0292)相关。健康志愿组血浆ApoM与HDL.C(r=0.3469，P=0.0095)、HDL.C/ApoAI(r=0.4146，P=0.0016)相关。 结论 ApoM可能参与了体内的胆固醇代谢，并与冠心病的形成与发展有关。
[关键词] 载脂蛋白M;冠心病;血脂
Correlation of apolipoprotein M with other apolipoproteins in coronary atherosclerotic disease patients
JIAO Guo-qing ，ZHANG Xiao-ying ，DONG Xuan ，Peter Nilsson-Ehle ，Ning XU
(Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery，The Third Affiliated Hospital，Suzhou University，Changzhou213003，China;Department of Clinical Chemistry，Institute of Laboratory Medicine，University Hospital of Lund，S.22185Lund，Sweden.)
Abstract:Objective To determine the plasma levels of apolipoprotein M(ApoM)in patients suffered from coronary atherosclerotic disease(CAD)and to investigate the correlation between ApoM and other apolipoproteins.Methods Determining plasma levels of ApoM by Dot-Blotting in70CAD patients and in85normal volunteers，and measuring plasma concentrations of apolipoprotein AI(ApoAI)，apolipoprotein B(Apo B)，lipoprotein a(Lpa)，total triglycerides(TG)，total cholesterol(TC)，cholesterols in high density lipoproteins(HDL.C)and low density lipoproteins(LDL.C)with the methods of automated immunoneph-elometry and enzymatic methods at the clinical laboratory，third affiliated hospital of Suzhou University，comparing the plasma levels of ApoM in CAD patients with normal volunteers and analyzing the correlation between ApoM and other apolipoproteins.Results The plasma concentrations of ApoM in CAD patients were significantly higher than those in normal volunteers(t=9.745，P<0.01)and negatively correlated with ApoAI(r=-0.2423，P=0.0433)，LDL.C/ApoB(r=-0.2481，P=0.0383)and LDL.C(r=-0.26080，P=0.0292)，however，ApoM in normal volunteers was positively correlated with HDL.C(r=0.3469，P=0.0095)and HDL.C/ApoAI(r=0.4146，P=0.0016).Conclusion ApoM might be involved in the metabolism of cholesterol in vivo and be associated with the development of CAD.
Key words:apolipoprotein M;coronary atherosclerotic disease;blood-lipid
冠心病是心血管系统的常见病，载脂蛋白作为脂蛋白的主要组成部分参与了血脂的代谢和调节，载脂蛋白异常和冠心病的发生发展有密切关系。载脂蛋白M(ApoM)是一种新近发现的高密度载脂蛋白，其生理功能尚不清楚，为了探讨ApoM是否在冠心病的发生发展中发挥作用，本研究检测了冠心病患者血浆中ApoM的水平，对ApoM和其他脂质成分进行了相关性研究。
1 对象与方法
1.1 研究对象
冠心病组:2000年3月至2003年3月住本院经冠脉造影确诊的冠心病患者70例，其中男47例，女23例，年龄43～81岁，平均(65.28±10.66)岁，合并糖尿病的患者除外。健康志愿者组:85名汉族健康输血员，其中男56例，女29例，年龄18～55岁，平均(29.34±9.54)岁，无冠心病心绞痛及高血压病史，血生化检查排除高脂血症，心电图未发现心肌缺血性改变。
1.2 标本和仪器
自冠心病患者及健康输血员空腹肘正中静脉采血5ml，EDTA抗凝，离心分离出血浆于-70℃保存。兔抗人ApoM多克隆抗体(一抗，由瑞典隆德大学临床化学研究所惠赠)，碱性磷酸酶标记的羊抗兔抗体(二抗，购自丹麦DAKO公司)，NBT/BCIP显色基质(购自上海晶美生物工程有限公司)，Hybond.C膜(购自Amer-sham Lifescience)，Beckman LX.420自动生化分析仪(Beckman公司)，凝胶成像分析仪及Quantity One软件(BIO.RAD)。
1.3 Dot.Blotting检测血浆ApoM
室温融化冰冻血浆，取3μl点样于Hybond.C膜，室温下干燥，以含BSA及Tween的TBS(TBS BSA Tween20=10034)4℃封闭膜过夜，加入兔抗人ApoM多克隆抗体(TBS一抗=5001)，室温2h后，TBS洗膜4次，每次10min，加入碱性磷酸酶标记的羊抗兔的二抗(TBS二抗=20001)室温2h后，依次以TBS、TBS+2%Tween20、TBS+2%Tween20、TBS洗膜，每次10min，加入显色剂NCBT/BCIP显色，以凝胶成像仪及Protein Quantity I软件分析。分析结果以ODu·mm -2 (单位面积的吸光度)表 示。为避免误差，所有的标本均于同一反应体系中进行，每份血浆重复检查3次，取3次的平均分析值为最终检测结果。
1.4 总三酸甘油酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL.C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL.C)、载脂蛋白AI(ApoAI)、载脂蛋白B(ApoB)及空腹血糖检测
低温保存的血浆一次性冻融，酶法检测TG、TC、HDL.C、LDL.C及空腹血糖，多点定标比浊法检测ApoAI、ApoB。所有标本由Beckman LX.420自动分析仪一次性检测。
1.5 统计学处理
所有数据均以x±s表示，用非配对t检验比较冠心病患者与健康志愿者血浆ApoM水平的差异，用Pearson相关分析法检验ApoM与其他血脂参数的相关关系，P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 冠心病患者与健康志愿者血浆ApoM的比较
用Dot.Blotting技术检测冠心病患者与健康志愿者血浆ApoM，结果显示:健康志愿者组血浆ApoM水平[(2.097±0.05988)ODu·mm -2 )]低于冠心病组血浆ApoM水平[(3.355±0.1222)ODu·mm -2 ](t=9.745，P<0.001)。冠心病组与健康志愿者组血浆ApoM的差异有明显统计学意义(图1)。
图1 冠心病患者与健康志愿者血浆ApoM水平比较(略)
2.2 冠心病患者血浆ApoM与其他血脂参数相关性分析
以Pearson相关分析法检验冠心病患者血浆ApoM与其他血脂参数的相关性分析，结果见表1。结果显示，血浆ApoM与LDL.C，LDL.C/ApoB，ApoAI呈负相关(图2)。健康志愿者组血浆ApoM与HDL.C，HDL.C/ApoAI呈正相关(图3)。血浆ApoM与其他血脂成分无明显的相关性(表1)。
图2 冠心病患者血浆ApoM与ApoA LDL.C，LDL.C/ApoB的相关关系 (略)
冠心病患者血浆ApoM与LDL.C呈负相关(r=-0.2608，P=0.0292);与LDL.C/ApoB呈负相关(r=-0.2481，P=0.0383);与ApoAI呈负相关(r=-0.2423，P=0.0433)
表1 冠心病组及健康志愿者组血浆ApoM与其他血脂参数的相关系数(略)
图3 健康志愿者组血浆ApoM与HDL.C，HDL.C/ApoAI的相关关系 (略)
健康志愿组血浆ApoM与HDL.C呈正相关(r=0.3469，P=0.0095);与HDL.C/ApoAI呈正相关(r=0.4146，P=0.0016)
3 讨论
载脂蛋白是脂蛋白的重要组成成分，迄今发现的载脂蛋白已有10余种，它们通过不同的途径调节体内的脂质代谢，如ApoAⅠ是通过激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)而参与HDL中胆固醇的逆向转运，ApoCⅡ是通过激活脂蛋白酯酶(LPL)的活性而影响体内三酸甘油酯的代谢。ApoB、ApoE是通过受体介导途径参与体内的乳糜微粒残体及中间密度脂蛋白(IDL)在肝脏的代谢 [1，2] 。载脂蛋白所介导的血脂异常在冠心病的发生发展中起着重要作用。大规模的流行病学研究表明，ApoAI水平降低，血浆总胆固醇升高、低密度脂蛋白胆固醇升高，高血压、糖尿病、吸烟、酗酒等与冠心病的发生发展明显相关，而高密度脂蛋白参与了机体胆固醇的逆向转运，与冠心病的发病率呈明显负相关 [3] 。
ApoM是一种新近发现的载脂蛋白，其基因位于6号染色体的主要组织相容性复合物Ⅲ区，特异性地表达于肝实质细胞和肾脏远曲小管上皮细胞 [4] 。ApoM主要存在于HDL中，少量存在于LDL及富三酸甘油脂蛋白(TGRLP)中，去脂蛋白血浆中ApoM仅痕量存在，肝脏合成的ApoM可能参与HDL的合成。以前的研究表明，低水平ApoAI系冠心病的独立危险因子 [1，5] 。本研究检测了70名冠心病患者血浆ApoM水平并与85名健康志愿者比较，显示冠心病患者血浆ApoM水平明显高于健康志愿者，且与血浆ApoAI呈明显的负相关，提示ApoM可能与冠心病的发生有一定关系。
HDL是机体胆固醇逆向转运的主要形式，其主要载脂蛋白为ApoAI、ApoC、ApoE及少量ApoM。ApoAI是通过激活LCAT参与胆固醇的代谢。LDL来源于血浆VLDL，其主载脂蛋白为ApoB100，LDL通过LDL受体介导途径及巨噬细胞等非受体介导途径清除。以前的研究发现高脂饮食后TGRLP中ApoM明显增高，提示ApoM可能参与脂质的代谢与调节 [6] 。本研究通过对健康志愿者血浆中ApoM与HDL.C及HDL.C/ApoAI的相关性研究发现，健康志愿者血浆中ApoM与HDL.C及HDL.C/ApoAI呈明显的正相关。而冠心病病人血浆中ApoM与ApoAI、LDL.C及LDL.C/ApoB呈明显的负相关，提示ApoM可能参与体内的胆固醇代谢，但具体的调节机制尚有 待进一步研究。
[参考文献]
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[2]FORTE T，McCALL M.The role of apolipoprotein A.I.con-taining lipoproteins in atherosclerosis[J].Curr Opin Lipidol，1994，5:354.364.
[3]REARDON M，NESTEL P，CRAIG I，et al.Lipoprotein pre-dictors of the severity of coronary artery disease in men and women[J].Circulation，1985，71:881.888.
[4]ZHENG X Y，DONG X，ZHENG L，et al.Specific tissue ecperssion and cellular localization[J].Acta Histochemical，2003，105:67.72.
[5]FRANCIS M C，FRANCIS J J.Coronary artery disease in pa-tients at low risk.apolipoprotein AI as an independent risk fac-tor[J].Atherosclerosis，2001，155:165.170.
[6]XU N，DAHLBACK B.A novel human apolipoprotein(ApoM)[J].J Biol Chem，1999，274:31286.31290.
[作者简介] 焦国庆(1970-)，男，江苏泰州人，主治医师。
(苏州大学附属第三医院胸外科，江苏常州 213003;Department of Clinical Chemistry，Institute of Laboratory Medicine，University Hospital of Lund，S.22185Lund，Sweden)
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