松花粉抗衰老作用的实验研究
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[摘要]目的 观察松花粉的抗衰老作用。 方法 用含松花粉的饲料喂养衰老小鼠，测定小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH.Per)的活性，测定脑组织中丙二醛(MDA)含量及脑组织和肝脏中的脂褐质(Lf)含量，同时测定胸腺和脾脏的重量及网状内皮系统的吞噬功能。结果 松花粉能明显增加衰老小鼠血清中SOD、CAT、GSH.Per活性，降低脑组织中MDA含量及脑组织和肝脏中的Lf含量，并增加胸腺和脾脏质量，提高网状内皮系统吞噬功能。 结论 松花粉具有抗衰老作用。
[关键词] 松花粉;抗衰老;超氧化物歧化酶;免疫吞噬系统功能;小鼠
Experimental study on effects of pollenpini on anti-aging
ZHAO Li-xin，YU Lu
(Graduate Team，First Military Medical University，Guangzhou510515，China;Department of Nephrology，the PLA305Hospital，Beijing100017，China)
Abstract:Objective To evaluate the effects of pollenpini on anti-aging.Methods After the mice were fed with animal feeds containing pollenpini for30days，the activities of serum superoxide dismutase(SOD)，catalase(CAT)，glutatbione peroxidase(GSH.Per)and the content of malondialdehyde(MDA)in brain and lipofuscin(Lf)in brain and liver，the weight of thymus gland and spleen and the immune-macrophage func-tion were detected.Results Pollenpini could obviously increase the activities of serum SOD，CAT and GSH.Per.It could decrease the content of MDA in brain and Lf in brain and liver.In addition，pollenpini could significantly increase the weight of thymus gland and spleen and the immune-macrophage function.Conclu-sion Pollenpini has anti-aging effect.
Key words:pollenpini;anti-aging;superoxide dismutase;immune-macrophage function;mice
松花粉药名松黄，是松科植物马尾松、油松或同属数种植物于春季花刚开时采摘花穗晒干收集，除去杂质所得的淡黄色细花粉。其成分稳定、不含激素，是花粉产品中的佼佼者。本实验旨在研究松花粉对小鼠的抗衰老作用。
1 材料和方法
1.1 材料
超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH.Per)、丙二醛(MDA)、脂褐质(Lf)及蛋白定量测定试剂盒购自南京建成生物医学工程研究所，松花粉由中国林业学院亚热带林业研究所提供，为天然松花粉。含松花粉的小鼠饲料为自行配制，按质量比配成含松花粉2%、5%的饲料。昆明种小鼠体重18～22g，由第一军医大学南方医院动物所提供。
1.2 方法
昆明种小鼠40只，雌雄兼用，其中10只月龄为3个月，构成青年对照组，普通饲料喂养;另外30只月龄为20个月，随机分成3组:(1)衰老对照组10只，普通饲料喂养;(2)衰老小鼠10只，用含2%松花粉饲料喂养;(3)衰老小鼠10只，用含5%松花粉饲料喂养。青年小鼠体重为(19.2±2.0)g，衰老小鼠体重为(19.8±2.1)g，衰老小鼠由第21个月开始，按不同分组喂养不同饲料，喂养30d。
1.3 实验指标测定
1.3.1 血清中的SOD、CAT、GSH.Per活性，脑组织中MDA含量及脑组织和肝脏中的Lf含量的测定 喂养30d后，于第31天将实验小鼠断头取血于肝素抗凝管内离心备用，迅速取脑和肝脏，用预冷的生理盐水制成10%组织匀浆，按试剂盒说明书中的方法测定血清中的SOD、CAT、GSH.Per活性，脑组织中MDA含量及脑组织和肝脏中的Lf含量。
1.3.2 免疫器官重量测定 喂养30d后，摘取胸腺和脾脏，用电子天平称重，记录器官质量。
1.3.3 网状内皮系统吞噬功能试验 喂养30d后，经尾静脉注入印度墨汁(用生理盐水稀释5倍)10ml·kg -1 ，注入后1min和5min分别从眼眶静脉取血20μl，溶于01%Na 2 CO 3 溶液2ml中摇匀，用722型光栅分光光度计(λ=680nm)比色测定光密度，计算吞噬指数κ(κ=100个巨噬细胞所吞噬鸡红细胞的总和/100)，取肝、脾称重，求出吞噬活性α[α=(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞)×100]。
1.4 统计方法
应用SPSS10.0统计软件进行统计分析，数据采用x±s表示，多组间样本均数的比较采用方差分析，其中两组间比较采用最小显著差法。
2 结果
2.1 动物的一般状况
给予松花粉喂养的两组小鼠，生长良好、皮毛光滑、活动敏捷，每周称重1次，体重依次递增，第1周末(20.7±2.3)g，第2周末(21.8±4.5)g，第3周末(22.3±3.6)g。青年对照组小鼠生长良好，皮毛光滑、反应敏捷，第1周末体重(19.5±1.6)g，第2周末(20.1±2.0)g，第3周末(20.4±1.4)g。衰老对照组小鼠生长良好，皮毛粗糙、反应迟钝、活动缓慢，第1周末体重(20.3±0.5)g，第2周末(20.7±0.8)g，第3周末(19.6±2.3)g。
2.2 松花粉对衰老小鼠血清中SOD、CAT、GSH.Per活性的影响
衰老对照组小鼠血清中SOD、CAT、GSH.Per活性显著低于青年对照组小鼠(均为P<0.05);而松花粉喂养的两组小鼠血清中SOD、CAT、GSH.Per的活性显著高于衰老对照组小鼠(均为P<0.05)。见表 1。
表1 松花粉对小鼠血清SOD、CAT、GSH.Per活性的影响(略)
2.3 松花粉对衰老小鼠脑组织MDA含量及脑组织和肝脏中Lf含量的影响
衰老对照组小鼠脑组织中MDA含量明显增高，而喂养松花粉的小鼠脑组织中的MDA含量明显降低，5%松花粉喂养组小鼠脑组织中MDA的含量与衰老对照组小鼠比较有显著性差异(P<0.05);衰老对照组小鼠脑、肝组织中Lf含量显著高于青年正常对照组(均为P<0.05)，松花粉均能使衰老小鼠脑组织中和肝脏组织中的Lf含量明显降低(均为P<0.05)。见表2。
表2 松花粉对小鼠脑和肝脏MDA及Lf含量的影响(略)
2.4 松花粉对小鼠免疫器官的影响
衰老对照组小鼠的胸腺和脾的重量显著低于青年对照组(均为P<0.05)，用松花粉喂养后可明显增加衰老小鼠胸腺和脾脏的质量，接近并可能超过青年对照组小鼠。见表3。
表3 松花粉对小鼠免疫器官质量的影响(略)
2.5 松花粉对小鼠网状内皮系统的影响
衰老对照组小鼠的吞噬指数和吞噬活性显著低于青年对照组(均为P<0.05)，2%和5%松花粉喂养组小鼠的吞噬指数和吞噬活性显著高于衰老组小鼠(均为P<0.05)。见表4。
表4 松花粉对小鼠网状内皮系统的影响(略)
3 讨论
衰老的病因和机制尚未明了，但是自由基学说是公认的衰老学说之一 [1] ，机体每天代谢时产生的自由基分子，在正常情况下可被清除，但在机体衰老时，体内抗氧化物质CAT、SOD、GSH.Per等抗氧化酶的活性均降低，而自由基代谢产物MDA含量却明显增高，MDA可进一步与磷脂酰乙醇胺和蛋白交联，生成无活性的Lf，沉积于组织和细胞，使RNA持续性降低，破坏细胞的结构，最后导致细胞无法维持代谢而衰老死亡 [2] 。因此提高抗氧化酶的活性，防止自由基对机体的危害，对延缓衰老过程有积极的作用。中医衰老学说中五脏损、阴阳失衡、气血失和及禀赋不足等是较为公认的。中医理论认为机体功能减退系肾虚所致，肾虚导致机体津液不足、调理失调、风寒湿热难抵、机体功能减退，肾虚则气滞，气滞则无力推动血运，引起血瘀，气虚则血瘀，血瘀则衰老渐至 [3] 。机体衰老时调节免疫功能、应激能力、耐疲劳能力均显著降低 [4] ，清除自由基和抗氧化能力降低 [5] 。
松花粉药名松黄，为鲜黄色或淡黄色细粉，其性味甘平无毒，松花粉含有高达二百余种营养成分，包括大多数的维生素、氨基酸、酶，其中每种成分含量均较大，同等重量的松花粉蛋白质总量较牛肉、鸡蛋多7～10倍，矿物质铁比菠菜含量高20倍，维生素A原型胡萝卜素要多20～30倍，更难得的是松花粉所含的二百余种营养成分全部具有活性。药理实验证明，松花粉中含有大量抗氧化物质，如维生素E、胡萝卜素及微量元素硒，可以抑制体内脂肪和蛋白质过氧化反应，具有延缓衰老的作用。松花粉进入人体后，可使SOD的活性增强，量级提高，增强清除自由基的能力，同时能清除沉积在皮肤表面和脑、心、肝等器官组织中的的老年斑，可抑制组织胞化，抑制人体衰老，提高人体免疫能力。松花粉明显改善D.半乳糖衰老模型小鼠T细胞亚群的变化，增强衰老鼠的免疫功能，能延长老龄鼠的生存时间 [6] 。本实验结果显示，给予衰老小鼠喂养含松花粉的饲料可以明显降低衰老小鼠脑组织MDA含量、脑和肝组织Lf含量，明显提高衰老小鼠血清中CAT、SOD、GSH.Per活性，表明松花粉可以提高机体抗氧化能力，有力清除衰老或老化机体过多生成的自由基，并且能增加免疫器官的重量，提高小鼠网状内皮系统的吞噬能力，起到延缓衰老的作用。
[参考文献]
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[3]毛连根，赵小津，丁世萍.补血祛瘀方抗衰老作用的实验研究[J].中国老年学杂志，2002，22(7):306.308.
[4]庞树铃，高金亮.中年大鼠气虚血瘀症的模拟及机制研讨[J].天津中医学院学报，1997，16(3):28.31.
[5]罗丹云.自由基学说和抗衰老[J].实用老年医学，1997，11(8):127.128.
[6]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].广州:广东科技出版社，1995.172.173.
[基金项目] 国家自然科学基金资助项目(30271645)。
[作者简介] 赵立新(1969-)，女，河北唐山人，主治医师，在读硕士研究生。
(第一军医大学研究生队，广州 510515;解放军第三О五医院肾内科，北京 100017)
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