细胞核转录因子和血管内皮细胞生长因子在胃癌组织中的表达及其意义
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[摘要]目的 研究早期、中期、晚期胃癌和不典型增生及慢性胃炎中细胞核转录因子.κBp65(NF.κBp65)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达,探讨胃癌发生、浸润和转移过程中NF.κBp65、VEGF的表达和微血管密度(MVD)的关系及其临床意义。 方法 收集1997年~2002年期间经术后病理证实的早期、中期和晚期胃癌患者62例作为研究对象,同时将15例不典型增生及20例慢性胃炎患者作为对照,进行免疫组织化学染色,检测NF.κBp65、VEGF的表达和MVD,分析它们之间的关系及其意义。 结果 胃癌组中NF.κBp65、VEGF的表达阳性率分别为62.9%、51.6%,而对照组的NF.κBp65、VEGF的表达阳性率仅为17.1%、11.4%,胃癌组与对照组NF.κBp65、VEGF的表达阳性率差异有显著性(均为P<0.01)。胃癌组中的MVD明显增高(P<0.01);胃癌组中,早期、中期和晚期胃癌之间NF.κBp65、VEGF表达阳性率和MVD差异有显著性(均为P<0.05)。NF.κBp65表达与VEGF表达呈正相关(r=0.593,P<0.001)。胃癌组中有淋巴结转移者VEGF的表达和MVD明显高于无淋巴结转移者(均为P<0.05)。 结论 胃癌中NF.κBp65、VEGF表达阳性率和MVD均增高,与肿瘤的浸润程度、淋巴结转移密切相关,NF.κB、VEGF对肿瘤血管生成有重要作用。
[关键词] 胃肿瘤;核转录因子;血管内皮细胞生长因子;微血管密度
Expression and clinical significance of nuclear factor and vascular endothelial growth factor in human gastric carcinoma tissue
CHEN Wei ,TANG Hai-tao,XU Jian-ming
(Department of Gastroenterology,Magang Hospital,Maanshan,2430000,China;Department of Gastroenterology,the First Affiliated Hospital,Anhui Medical University,Hefei233000,China)
Abstract:Objective To investigate the expression of neclear factor.κBp65(NF.κBp65),vascular en-dothelia growth factor(VEGF)and microvessel density(MVD)in human gastric carcinoma,and to study the relationship among expression of NF.κBp65,VEGF and MVD and their significance in human gastric carci-noma.Methods Sixty-two patients with gastric carcinoma who underwent surgical resection from1997to2002were followed up.Expression of NF.κBp65,VEGF and MVD were examined by S.P immunohisto-chemistry in62archival paraffin embedded gastric carcinoma tissue specimens and35patients of control.The relationship among expression of NF.κBp65,VEGF and MVD in human gastric carcinoma and control group were analyzed by SPSS10.0version software.Results The expression of NF.κBp65,VEGF were obviously higher in gastric carcinoma group than that in the control group(62.9%versus17.1%,51.6%versus11.4%,respectively,all P<0.001).The difference between expression of NF.κBp65、VEGF and MVD in different stages of gastric carcinoma were significant(all P<0.05).The expression of NF.κBp65was significantly correlated with VEGF(r=0.593,P<0.001).The expression of VEGF and MVD were significantly higher in lymph-node-metastases group than that in no-lymph-node metastases group(all P<0.05).The expression of NF.κBp65and VEGF were highly correlated with MVD,which was significantly higher in the NF.κBp65(+)group and VEGF(+)group(all P<0.001).Conclusion The expression of NF.κBp65,VEGF and MVD are associated with the different stages of gastric carcinoma,lymph-node metastases and prognose.Expression of NF.κBp65and VEGF are highly correlated with MVD.The relation-ship among NF.κBp65,VEGF and MVD indicates that NF.κBp65,VEGF may play an important role in oc-currence and metastases of gastric carcinoma.
Key words:gastric carcinoma;nuclear factor;vascular endothelial growth factor;microvessel density
胃癌是临床中最常见的恶性肿瘤之一,死亡率居恶性肿瘤之首,约50%的胃癌患者在诊断时即发生了转移 [1] ,而且转移是影响胃癌患者预后的主要原因。因此,研究胃癌浸润和转移的发生机制及其分子生物学基础,对于控制胃癌的转移和提高胃癌的生存率具有重要的临床意义。细胞核转录因子.κB(nuclear fac-tor kappa B,NF.κB)是一种重要的转录因子,其激活参与炎症、细胞增殖、细胞凋亡等基因的调节 [2] 。文献已经证明,在胰腺癌、乳腺癌等人类肿瘤中,存在着NF.κB的活化和高表达 [3,4] 。血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在损伤修复、肿瘤发生和转移等病理和生理过程中起重要作用。微血管密度(microvessel density,MVD)是反映肿瘤血管生成的指标,MVD可以直观、敏感地评估血管生成状态。
1 资料与方法
1.1 研究对象
收集1997年1月~2002年12月经手术病理证实的早期胃癌29例、中期胃癌13例、晚期胃癌20例,其中有淋巴结转移者20例。重新制作石蜡切片,分别进行NF.κBp65、VEGF和第Ⅷ因子相关抗原标记微血管内皮细胞的免疫组织化学(简称免疫组化)染色,用PBS代替第一抗体作为空白对照。另将20例慢性胃炎和15例不典型增生患者作为对照。
1.2 试剂
兔抗人NF.κBp65单克隆抗体(SC.8008)、VEGF单克隆抗体(SC.7269)、兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体(ZA.01)购自美国Santa Cruz公司。免疫组化染色(S.P法)按说明书步骤进行。
1.3 免疫组化结果判断
NF-κBp65免疫组化阳性产物呈棕黄色细颗粒状,主要定位于肿瘤细胞浆和核膜。在高倍镜下进行计数,计数100个细胞,表达强度依照阳性产物着色强度按Handel的分级标准记分 [5] :阴性<5%,阳性≥5%。VEGF主要定位在肿瘤细胞的胞浆和胞膜上,阳 性者可见胞浆内或胞膜上的棕黄色颗粒。在高倍镜(×400)下进行计数,每个高倍视野计数100个细胞,阳性细胞<5%为阴性,≥5%的肿瘤细胞胞浆或胞膜染色为阳性,观察4个视野,求其平均数 [6] 。MVD的计算按Weidner [7] 报道的方法进行:先在低倍镜(×100)下全面观察切片,确定肿瘤内血管密度最高处,再在高倍镜下(×200)计数被第Ⅷ因子抗体染成棕色的血管数目,计数4个视野内的微血管数,取其平均数作为该病例的MVD。
1.4 统计学处理
数据均值的比较采用t检验,百分率的比较采用χ 2 检验。P<0.05为差异有显著意义。本组数据的统计分析均利用SPSS10.0版统计软件包来完成。
2 结果
2.1 NF.κBp65和VEGF的表达情况
胃癌组NF.κBp65表达阳性率为62.9%(39/62),对照组为17.1%(6/35),胃癌组与对照组NF.κBp65阳性表达差异有显著性(χ 2 =18.83,P<0.01)。29例早期胃癌中NF.κBp65表达阳性率为44.8%(13/29),13例中期胃癌阳性率为69.2%(9/13),20例晚期胃癌阳性率为85%(17/20),早期、中期和晚期胃癌3组之间NF.κBp65表达阳性率差异有显著性(χ 2 =8.468,P<0.05)。
胃癌组VEGF表达阳性率为51.6%(32/62),对照组为11.4%(4/35),胃癌组和对照组VEGF蛋白表达阳性率差异有显著性(χ 2 =9.31,P<0.01)。29例早期胃癌中VEGF表达阳性率为34.5%(10/29),13例中期胃癌为61.5%(8/13),20晚期胃癌为70.0%(14/20),早期、中期和晚期胃癌VEGF蛋白表达阳性率差异有显著性(χ 2 =6.62,P<0.05)。20例胃癌淋巴结转移中有15例VEGF表达阳性,42例无淋巴结转移的胃癌仅有18例VEGF表达阳性,两者之间差异有显著性(χ 2 =6.466,P<0.05)。
2.2 MVD在胃癌组和对照组中的表达
对照组MVD值显著低于胃癌各组(均为P<0.01)。中期和晚期胃癌患者的MVD值与早期胃癌相比差异有显著意义(均为P<0.01),中期和晚期胃癌之间的MVD值差异无显著性(P>0.05)。见表1。
表1 胃癌组和对照组MVD的比较(略)
2.3 NF.κBp65、VEGF表达与MVD值的关系
胃癌患者有淋巴结转移者MVD值为28.25±10.09,无淋巴结转移者为22.90±8.18,两者差异有显著性(P<0.05)。
NF.κBp65表达阳性的胃癌组织中MVD值明显高于NF.κBp65表达阴性者,两者差异有显著性(P<0.001)。VEGF表达阳性的胃癌组织中MVD值显著高于VEGF表达阴性者(P<0.001)。见表2。
表2 NF.κBp65、VEGF表达与MVD值的关系(略)
2.4 NF.κBp65和VEGF在胃癌患者中表达的相关性
胃癌患者的NF.κBp65和VEGF表达存在正相关性,相关系数r=0.593,P<0.001。见表3。
表3 NF.κBp65和VEGF在胃癌患者中表达的相关性(略)
3 讨论
NF.κB是1986年Sen和Baltimore首先从B淋巴细胞核提取物中检出的,可与免疫球蛋白的轻链增强 子κB序列特异结合的核蛋白因子。NF.κB的亚单位有RelA/(p65)、RelB、C.Rel、p50(NF.κB 1 )和p52(NF.κB 2 )。细胞在静息状态下,NF.κB以无活性的潜在状态存在于细胞浆中,它与一种抑制因子IκB(Inhibitors of kappa B)结合组成异源二聚体p50/p65.IκB。有活性的DNA结合的NF.κB是一个二聚体,标准的NF.κB是p50.p65的二聚体。
众所周知,胃癌组织学演变过程,包括浅表性胃炎—萎缩性胃炎—肠化生—不典型增生—胃癌,是胃癌发生的经典过程 [8] 。研究发现NF.κBp65的表达阳性率在早期胃癌、中期胃癌和晚期胃癌3组间存在显著性差异,NF.κBp65的表达阳性率从慢性胃炎、不典型增生向胃癌组逐渐增高。随着胃癌的浸润深度不同,NF.κBp65的阳性表达率也逐渐上升。NF.κB的表达阳性率随着胃癌的浸润加深逐渐升高,VEGF表达也呈现升高的趋势,胃癌的NF.κB的表达与VEGF表达呈明显相关性。而MVD的改变则直接与VEGF有关。所以,在胃癌演变过程中,NF.κB可能促进VEGF的产生,从而促进胃癌的浸润和转移。本研究结果表明,NF.κB蛋白表达和胃癌的血管生成显著相关,进一步佐证了NF.κB对多种肿瘤相关因子和肿瘤血管生成的多个环节具有调节作用的理论。
目前认为,VEGF是迄今鉴定出来的最重要的血管生成因子,可作为肿瘤代谢及转移的标记 [9] 。肿瘤细胞可分泌VEGF诱导肿瘤血管形成,从而支持肿瘤生长。VEGF还可诱导淋巴管增生和扩张,使肿瘤细胞进入淋巴管和淋巴结导致转移。胃腺癌组织中VEGF阳性高表达与早期胃癌的转移和晚期胃癌的预后密切相关 [10] 。
本组结果显示,在62例胃癌中有32例VEGF蛋白阳性表达,占51.6%。随着胃癌的浸润加深,VEGF的表达阳性率也逐步上升,说明VEGF的表达与浸润的深度有相关性。而在对照组,慢性胃炎、不典型增生组VEGF仅有少量表达,这说明胃癌细胞具有分泌VEGF的特性,并具有较好的特异性。在34例VEGF表达阳性的胃癌患者中,MVD值明显高于VEGF阴性者,差异有显著性(P<0.01)。VEGF的表达和MVD值在中期胃癌组织中明显高于早期胃癌,在伴有淋巴结转移的胃癌组织中明显高于不伴有淋巴结转移者,说明VEGF可诱导淋巴管增生和扩张,使肿瘤细胞进入淋巴管和淋巴结导致转移。
本研究结果显示,早期、中期和晚期胃癌组织之间的MVD值差异有显著性,胃癌组的MVD值明显高于慢性胃炎、不典型增生组。伴有淋巴结转移者MVD值明显高于无淋巴结转移者。癌前阶段MVD值很低,进入早癌阶段后迅速升高,促进胃癌的浸润和转移。MVD值与组织类型无关,有转移明显高于不伴有转移者,肯定了MVD与肿瘤转移的相关性。这和Nobuhiko等 [11] 报道的一致。因此,肿瘤进展期新生血管增加是导致转移的有力证据。中期胃癌MVD值明显高于早期胃癌,说明随着肿瘤细胞由粘膜层、粘膜下层向肌肉层、浆膜层侵袭和转移,肿瘤内微血管密度不断增高。以上结果均提示MVD可反映胃癌组织的生物学行为。
在胃癌的发生和发展过程中,NF.κB、VEGF的表达和MVD呈逐渐升高的趋势。胃癌组织中NF.κB、VEGF的表达阳性率和MVD值均明显高于对照组。NF.κB调节多种癌基因表达,其表达与胃癌的浸润程度有关。胃癌组中VEGF高表达是导致胃癌浸润转移的重要因素。NF.κB和VEGF的表达存在正相关性,NF.κB通过多种因子调节VEGF,促进肿瘤的血管生长,对胃癌的发生和发展起重要作用。深入探讨NF.κB在病理状态下的激活机制将为肿瘤的抗血管形成治疗提供一条新思路。
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[作者简介] 陈伟(1964-),男,江苏扬州人,副主任医师,医学硕士。
(马鞍山市马钢医院消化科,安徽马鞍山 243000;安徽医科大学第一附属医院消化科,安徽合肥 233000)
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