氨磷汀对化疗药物抗卵巢癌细胞的影响
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参见附件(200KB，3页)。
[摘要]目的 评价细胞保护剂氨磷汀(amifostine)对不同化疗药物抗卵巢癌细胞的影响。 方法 用MTT法分别测定顺铂、长春新碱、依托泊甙和丝裂霉素对体外培养的Ho.8910肿瘤细胞系的抑制作用，实验组加化疗药前30min经600mg·L -1 氨磷汀处理，对照组不用氨磷汀处理，余同实验组，培养后比较两组细胞增殖的抑瘤率。 结果 实验组与对照组比较，两组肿瘤细胞抑制率无显著性差异(P>0.05)。 结论 氨磷汀不影响顺铂、依托泊甙、丝裂霉素和长春新碱对Ho.8910肿瘤细胞的抑制作用。
[关键词] 细胞保护剂;氨磷汀;依托泊甙;丝裂霉素;顺铂;长春新碱;化学治疗
Effect of amifostine on chemistry anticese avarian cancer cell
WANG Gen-ju ，HAN Guo-rong ，YE Yin-ying ，YU Min-min
(1.Department of Obstetrics and Gynecology，School of Clinical Medicine Science，Southeast University，Nanjing210009，China;2.Department of Obstetrics and Gynecology，the2nd Hospital of Nanjing，Affiliated to Medical College，Southeast University，Nanjing210009，China;3.Central Laboratory，School of Clinical Medicine Science，Southest University，Nanjing210009，China)
Abstract:Objective To evaluate the therapentic effect of amifostine on different chemistry anticese human ovarian cancer cell in vitro.Methods MTTwas used to investigate cell inhibition effects of amifotine on the ovari-an cancer cell received chemotherapy with DDP，MMC，VCR，VP-16respectively.The cell lines were divided into two groups，the amifostine group and control group.The control group was only received DDP，MMC，VCR，or VP-16respectively.The cell lines in the amifostine group were received600mg·L -1 amifostine30minites before che-otherapy.Then the inhibitory rates of two groups were compared.Result There was no significant difference of the inhibitory rate between the amifostine group and the control groupP>0.05).Conclusion Amifostine has no ef-fect on the chemotherapy with DDP，MMC，VCR and VP-16on Ho-8910cell.
Key words:pretective agent;amifostine;etoposide;mitromycin;cisplatin;vincristine;chemotherapy;Ho-8910cell (Modern Medical Journal，2006，34:12.14)
使用任何细胞保护剂都有保护肿瘤的潜在风险，理想的细胞保护剂应是确保对正常组织起选择性保护作用，又不影响抗肿瘤的疗效1] 。目前所做的研究表明广谱的细胞保护剂氨磷汀对正常组织的保护作用是肯定的，但是对于肿瘤的保护作用不能完全排除[2] 。为了检测氨磷汀对化疗药物抗肿瘤作用的影响，我们观察比较了体外应用丝裂霉素(MMC)、顺铂(DDP)、长春新碱(VCR)和依托泊甙(VP.16)4种药物单独应用及与氨磷汀联合应用对人卵巢癌细胞系Ho.8910细胞的杀伤作用，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 试剂
含10%小牛血清的RPMI1640培养液由中山医科大学微生物学教研室提供。
1.2 抗癌药物
MMC为日本明智药厂产品，DDP为山东齐鲁制药厂产品，VCR为广州明兴制药厂、VP.16为西安光华药厂生产，以上药物均稀释成30倍的峰浓度(PPC)，分装后-20℃保存备用。化疗药物用药浓度采用血浆的峰浓度为参照，DDP以4倍的梯度由低到高，MMC、VCR、VP.16以2倍的梯度递增。
1.3 细胞保护剂及卵巢癌细胞
氨磷汀由南京振中生物工程有限公司提供，Ho.8910细胞由中国医学科学院上海细胞研究所提供。
1.4 仪器
核蛋白检测仪为SPECERA MAX.250型
1.5 实验方法
用MTT法检测氨磷汀对MMC、DDP、VP.16、VCR在体外抑制Ho.8910细胞增长的影响，将复苏的Ho.8910细胞接种于10%小牛血清RPMI1640培养液中，置于37℃、体积分数为5%的CO 2 饱和湿度培养箱，用0.25%胰酶消化传代，每2天传代1次，试验时取对数生长期细胞。实验组:将浓度为600mg·L -1 的氨磷汀200μl培养液作用于96孔板的o.8910细胞(3×10 3 个·孔 -1 )，培养30min后吸去全部培养液，再分别加入不同浓度DDP、MMC、VCR、和VP.16200μl培养液到96 孔板中培养3d，每孔加入5g·L -1 的MTT20μl继续培 养4h，轻轻吸出上清液，加入1mmol·L -1 HCl异丙醇(1∶10)，用核酸蛋白检测仪于波长570nm处进行检测。对照组不加氨磷汀，余步骤同实验组。空白对照组:不加药物，只加培养液。实验组生长抑制率=(1-实验组OD值.对照组OD值)Ⅹ100%，对照组生长抑制率=(1-对照组OD值.空白对照组OD值)×100%。
1.6 统计学方法
采用SAS软件处理，行方差分析。
2 结 果
空白对照组对细胞生长无抑制，对Ho.8910细胞的抑制率为0。氨磷汀对不同浓度的MMC、DDP、VP.16、VCR作用于Ho.8910细胞抑制率的影响，见表1～4。表1 氨磷汀在体外对不同浓度丝裂霉素作用于表2 氨磷汀在体外对不同浓度顺铂作用于 表3 氨磷汀在体外对不同浓度依托泊甙作用于从表1～4可以看出，随着化疗药物浓度的增加，对卵巢癌细胞的抑制也明显增加。但4种化疗药物单独处理组与加入氨磷汀600mg·L -1 组比较，抑制率没有明显差异(均P>0.05)。实验组与没有加化疗药物空白对照组的肿瘤细胞增殖比较，经统计学分析无明显差异(P>0.05)。以上结果表明氨磷汀对卵巢癌细胞无抑制作用，也不降低化疗药物对细胞的杀伤效果。表1和表3显示出化疗药物在高浓度联合使用氨磷汀时对肿瘤细胞增殖的抑制率较单独应用稍有下降，低浓度时稍有升高;表2显示出顺铂在联合使用氨磷汀时对肿瘤细胞增殖的抑制率较单独应用稍有下降，表4示单独应用长春新碱与联合使用氨磷汀时没有显示明显的规律性;但通过t检验，均P>0.05，无明显统计学差异。
3 讨 论
卵巢癌是危害妇女生命健康的常见恶性肿瘤，手术和化疗是主要的治疗手段，其中化疗起着越来越重要的作用。而且很多化疗药物疗效与剂量呈正相关，提高剂量对肿瘤的杀伤作用明显提高。但疗效提高的同时，也显示明显的毒性作用。多年以来，人们一直在探索如何避免和减轻化疗药物在治疗卵巢癌过程中对正常组织的毒副作用，以提高化疗效果。
20世纪中期发现氨磷汀是广谱的细胞保护剂 [3] 。氨磷汀作为一种亲核性的前体物质通过膜碱性磷酸酶的作用，脱磷酸转变成有活性的形式WR.1065(游离硫醇)而起作用。其入体内后经细胞膜上结合的碱性磷酸脂酶作用，即可转化为具有细胞渗透性的含游离巯基的活性代谢物，磷酸脂酶的活性与pH值成正比。
而肿瘤细胞多是厌氧代谢，pH值范围较低，导致对正 常组织有更高的选择，因此在治疗剂量下正常组织中WR.1065比肿瘤组织中浓度高出很多，同时WR.1065有很强的消除化疗产生自由基的能力，并能和烷化剂、铂剂及其活性代谢产物直接结合并脱毒。因此，氨磷汀能消除化疗的毒副作用，且不降低化疗的效果，从而达到选择性保护正常细胞的目的[4] 。 本实验参考了一些研究者的数据 [5-6] ，用600mg·L
-1 氨磷汀在体外与DDP、VP.16、MMC和VCR联合应用及化疗药物单独应用时对Ho.8910肿瘤细胞的疗效。实验结果表明联合氨磷汀组与化疗药物单独处理组的卵巢癌细胞增殖率无显著差异，表明氨磷汀对卵巢癌细胞无保护作用，也不降低化疗药物对卵巢癌细胞的抑制率。氨磷汀在卵巢癌治疗中有很好的临床试用前景，值得进一步研究开发和临床推广。但在化疗药联合氨磷汀应用时，对于各药的剂量、浓度和作用时间还值得进一步探讨。
[参考文献]
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(1.东南大学临床医学院妇产科，江苏南京 210009;
2.东南大学附属南京第二医院妇产科，江苏南京 210009;
3.东南大学临床医学院中心实验室，江苏南京 210009)
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