保存时间对腹水腺苷脱氨酶活性的影响
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[摘要] 目的探讨不同保存时间对腹水腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)活性的影响。方法收集结核性腹水患者腹水标本10份、恶性肿瘤患者腹水标本6份和肝硬化患者腹水标本6份，将1h内ADA活性测定结果作为对照，分别在第1、2、3、7、10天对保存在-20℃的标本进行ADA活性检测，比较不同时间点测定结果与1h内测定结果的差异和相关性。结果不同放置时间ADA活性和1hADA活性的差异无统计学意义(均P>0.05)；第1、2、3、7天ADA活性和1h内测定结果的相关系数大于0.9(均P<0.01)，第10天小于0.9(P<0.01)。结论腹水样本放置于-20℃，10d内ADA活性改变无统计学意义，不影响检测结果。
[关键词] 腺苷脱氨酶；腹水；保存时间
[中图分类号] R446.1[文献标示码] B
[文章编号] 1671-7562(2007)02-0148-02
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腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)是嘌呤代谢过程的重要限速酶，催化腺苷和脱氧腺苷脱氨基。ADA作为结核诊断的特异标记物,其临床意义在医学界已获得了较高评价[1]。目前有研究显示，在其它疾病，如淋巴瘤、胃癌、结肠癌、肝癌和肝硬化等也可见ADA活性明显升高，所以ADA对于临床疾病的诊断具有较重要的意义[2]。目前腹水ADA测定为非临床常规检验项目，内在和外在因素对ADA活性也会产生影响。本研究探讨不同放置时间对腹水样本ADA活性的影响。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集来我院治疗的结核性腹水患者腹水标本10份，恶性肿瘤患者腹水标本6份，肝硬化患者腹水标本6份。以上病例均经病理学、B超、CT及临床确诊。结核性腹水诊断除符合抗结核治疗有效外，下列条件至少满足1条：(1)合并肺结核或肠结核；(2)结核菌素试验呈强阳性；(3)腹膜活检病理结果显示结核性病变；(4)腹水为渗出液，细菌培养找到结核分枝杆菌；(5)X线钡餐检查发现肠粘连现象。
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1.2 标本处理
腹腔穿刺抽取腹水放置于含有肝素抗凝剂的试管中，在1h内进行离心，取适量上清液测定ADA活性。剩余上清液保存于-20℃冰箱中，分别在第1、2、3、7、10天进行ADA活性测定，并与1h内测定结果比较。
1.3 测定方法
ADA测定采用酶显色方法。腺苷经ADA 特异性催化生成次黄苷及氨,次黄苷经嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)催化生成尿酸与过氧化氢(H2O2),H2O2与4-氨基安替比林偶联酚在过氧化物酶(POD)催化下生成红色醌亚氨染料,在550nm 处监测吸光度增加的速率,从而计算出ADA的活性。仪器采用日立7150全自动生化分析仪。
1.4 统计学处理
计量数据以中位数和百分位数表示，不同放置时间ADA活性与1h内测定ADA活性的比较采用Wilcoxon秩和检验；不同时间测定结果与1h测定结果的相关性采用Pearson′s相关分析，P<0.05认为有统计学意义。
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2 结果
2.1 不同保存时间腹水ADA活性与1hADA活性的比较
1h内ADA测定结果为47.1U•L-1(28.6～80.5U•L-1)，放置1、2、3、7、10dADA活性与1h内ADA活性差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。
2.2 相关性分析
-20℃条件下放置1、2、3、7d的腹水样本ADA活性与1h内测定ADA活性的相关系数均>0.9，分别为0.986，0.982，0.994，0.959(均P<0.01);第10天腹水样本ADA活性与1h内测定ADA活性相关系数[3]。研究表明ADA对诊断结核性渗出液的特异性和敏感性明显优于活检和细菌学方法[4]。腹水直接涂片和培养查结核杆菌的检出率低；结核杆菌培养需要时间长，延误诊断时机。而ADA活性检测费用低廉，方法简单，是优良检测指标。有研究表明酶显色法测定ADA活性灵敏度高,稳定时间长,精密度及准确度高,线性范围较宽,而且对胆红素、血脂、肝素及低浓度维生素C(100mg•L-1)的抗干扰性强[5]。但是需要考虑一些外在因素，例如腹水样本的保存时间对ADA活性的影响。有研究[6]证明无论保存在4℃还是-20℃，EDTA为抗凝剂的胸水样本可以保存10d，且ADA活性变化无统计学意义。Giusti等[7]报道，胸水样本最好在3d之内进行检测；最近的研究表明胸水样本在2个星期后检测，ADA活性下降到80%[8]。Lee等[9]报道胸水样本在-70℃条件下保存，酶活性可保持至少6个月。目前腹水样本采用肝素抗凝，了解腹水合适的保存时间同样也非常重要，因为：(1)当意外结果出现时，样本需要复查；(2)节假日或者休息日样本不能及时检测；(3)ADA测定为非常规检测项目，中小医院没有开展，需要送到上级医院进行检测；(4)其它原因导致的ADA无法及时检测。所以需要明确保存时间对ADA活性的影响，以及ADA的最佳测定时间。
本研究结果显示，不同保存时间ADA活性差异无统计学意义(P>0.05)，但是随保存时间延长，ADA的活性有少许下降。第10天ADA活性与1hADA活性相关系数, 百拇医药(梁 彬 程大也 孔 虹)