硫酸亚铁对溃疡性结肠炎模型大鼠氧化应激状态的影响(1)
[摘要]目的考察口服硫酸亚铁(FeSO4)对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠氧化应激状态的影响。方法采用TNBS乙醇溶液复制UC大鼠模型，雄性SD大鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、FeSO4对照组(100mg·kg-1·d-1)和FeSO4低剂量组(50mg·kg-1·d-1)、中剂量组(100mg·k-1·d-1)和高剂量组(300mg·kg-1·d-1)，给药2周后分别观察大鼠的一般状态、组织病理学变化、组织及血清超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)水平。结果FeSO4中、高剂量组大鼠体质量减轻，腹泻动物数增加，结肠组织损伤加重，血清与结肠组织SOD活性降低、MDA水平升高(P<0.05)。结论UC模型大鼠体内存在氧化应激，口服补充FeSO4可能会进一步加剧其体内氧化应激状态及结肠组织病理学损伤。
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[关键词]硫酸亚铁；溃疡性结肠炎；三硝基苯磺酸；氧化应激；大鼠
[中图分类号]R574.62；11331 [文献标识码]A [文章编号]1671-7562(2007)04-0304-04
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种病因不明的直肠和结肠慢性非特异性炎症，临床主要表现为反复发作的腹痛、腹泻及黏液脓血便，重症或病情持续活动的患者可出现缺铁性贫血。临床观察发现，给予UC患者口服铁剂不能很好地被耐受，甚至会加重胃肠道症状或促进疾病活动。硫酸亚铁(ferrous sul-fate，FeSO4)是临床最为常用的铁剂之一，同时也是一种强氧化剂，可能会因产生自由基(oxygen-derived freeradicals，OFR)而加重组织损伤。本实验利用三硝基苯磺酸(2，4，6。trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS)复制uC模型，观察FeSO4对UC模型大鼠氧化应激状态的影响，为临床治疗提供依据。
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1 材料和方法
1.1 药物和试剂
TNBS购于S igma公司，5%(W/V)水溶液，批号为P2297；FeSO4，上海黄浦制药有限责任公司生产，批号为050606，轻轻把FeSO4片研碎，称取一定量的粉末，加入蒸馏水配成100mg·ml-1的混悬液备用；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、考马斯亮兰蛋白检测试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品，批号为20060323。
1.2 动物
雄性SD大鼠60只，体质量200-220g，由安徽医科大学实验动物中心提供，普通级。
1.3 仪器
756MC紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，TGL-16H高速离心机(珠海黑马医学仪器有限公司)，可控式硅恒温水浴锅(上海锦屏仪器仪表有限公司)，QL-901漩涡混合器(江苏海门麒麟医用仪表厂)，电子分析天平(上海天平仪器厂)，DIAX-900内切式组织匀浆机(德国Heidolph公司)。
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1.4 大鼠UC模型制备
健康大鼠60只，随机分为6组。留2组作正常对照组与FeSO4对照组，余4组均制备模型，禁食不禁水24h后，腹腔注射3%戊巴比妥钠(1ml·kg-1)使大鼠轻微麻醉后，将直径2mm的乳胶管经肛门轻轻插入大鼠体内大约8cm处，将TNBS(125mg·kg-1)的50%乙醇溶液缓缓注入到大鼠肠腔内，提起大鼠尾部，倒置30s，使造模剂充分渗入大鼠肠腔。
1.5 分组及给药
将正常大鼠随机分为正常对照组与FeSO4对照组，每组10只；将造模大鼠随机分为模型对照组，FeSO4给药高、中、低剂量组，每组10只。FeSO4对照组大鼠，按照100mg·kg-1·d-1灌胃FeSO4混悬液；FeSO4高、中、低剂量组大鼠，分别按照300mg·kg-1·d-1、100mg·kg-1·d-1、50mg·kg-1·d-1灌胃FeSO4混悬液；正常对照组及模型对照组大鼠每天灌胃同体积生理盐水，各组大鼠均在造模后6h开始给药，连续给药2周。
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1.6 症状观察
每天对各组大鼠进行称重，观察体质量变化并记录；观察大鼠粪便形状，记录大鼠发生腹泻、血便的数量。
1.7 结肠黏膜组织损伤评分
各组大鼠给药2周后，3%戊巴比妥钠过量麻醉，腹主动脉取血2ml，离心后置-80℃冰箱保存备用。将肛门以上10cm肠段取出，沿肠系膜纵行切开，用冰生理盐水冲洗，并称量。将黏膜向上展开，观察黏膜损伤并按照Wallace和Keenan1990年的评分标准进行评分：0分为无炎症和溃疡；1分为局部充血但无溃疡；2分为有溃疡但无充血；3分为有1处溃疡及炎症；4分为有2处或2处以上溃疡及炎症；5分为溃疡延伸超过2cm。同时取少量炎症肠组织，迅速放置液氮罐中备用。
1.8 病理组织切片观察
取肛门以上8cm肠段卷起，置10%中性甲醛液中固定，石蜡包埋，行4μm厚连续切片，HE染色观察组织学变化。
, http://www.100md.com
1.9 生化指标测定
血清及结肠组织MDA、SOD均按照检测试剂盒说明书进行操作。
1.10 统计学处理
计量指标以x±s表示，多组间比较行方差分析，各组间两两比较行LSD检验，采用SPSS12.0软件进行统计分析。
2 结 果
2.1 一般状态及大便性状的变化
正常组与FeSO4对照组大鼠活动如常，反应机警，毛发有光泽，饮食正常，体质量增长较多，无腹泻及便血；制模大鼠精神萎靡，毛发无光泽，饮食减少，均出现不同程度的腹泻、便血。正常对照组与FeSO4对照组大鼠体质量增加、腹泻及便血无显著性差异；与正常对照组比较，模型对照组大鼠体质量增加明显减少(P<0.01)；FeSO4中、高剂量组大鼠体质量增加显著, http://www.100md.com(张道权 吴正祥 吴 强 杨 枫 吴正升)
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[关键词]硫酸亚铁；溃疡性结肠炎；三硝基苯磺酸；氧化应激；大鼠
[中图分类号]R574.62；11331 [文献标识码]A [文章编号]1671-7562(2007)04-0304-04
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种病因不明的直肠和结肠慢性非特异性炎症，临床主要表现为反复发作的腹痛、腹泻及黏液脓血便，重症或病情持续活动的患者可出现缺铁性贫血。临床观察发现，给予UC患者口服铁剂不能很好地被耐受，甚至会加重胃肠道症状或促进疾病活动。硫酸亚铁(ferrous sul-fate，FeSO4)是临床最为常用的铁剂之一，同时也是一种强氧化剂，可能会因产生自由基(oxygen-derived freeradicals，OFR)而加重组织损伤。本实验利用三硝基苯磺酸(2，4，6。trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS)复制uC模型，观察FeSO4对UC模型大鼠氧化应激状态的影响，为临床治疗提供依据。
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1 材料和方法
1.1 药物和试剂
TNBS购于S igma公司，5%(W/V)水溶液，批号为P2297；FeSO4，上海黄浦制药有限责任公司生产，批号为050606，轻轻把FeSO4片研碎，称取一定量的粉末，加入蒸馏水配成100mg·ml-1的混悬液备用；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、考马斯亮兰蛋白检测试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品，批号为20060323。
1.2 动物
雄性SD大鼠60只，体质量200-220g，由安徽医科大学实验动物中心提供，普通级。
1.3 仪器
756MC紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，TGL-16H高速离心机(珠海黑马医学仪器有限公司)，可控式硅恒温水浴锅(上海锦屏仪器仪表有限公司)，QL-901漩涡混合器(江苏海门麒麟医用仪表厂)，电子分析天平(上海天平仪器厂)，DIAX-900内切式组织匀浆机(德国Heidolph公司)。
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1.4 大鼠UC模型制备
健康大鼠60只，随机分为6组。留2组作正常对照组与FeSO4对照组，余4组均制备模型，禁食不禁水24h后，腹腔注射3%戊巴比妥钠(1ml·kg-1)使大鼠轻微麻醉后，将直径2mm的乳胶管经肛门轻轻插入大鼠体内大约8cm处，将TNBS(125mg·kg-1)的50%乙醇溶液缓缓注入到大鼠肠腔内，提起大鼠尾部，倒置30s，使造模剂充分渗入大鼠肠腔。
1.5 分组及给药
将正常大鼠随机分为正常对照组与FeSO4对照组，每组10只；将造模大鼠随机分为模型对照组，FeSO4给药高、中、低剂量组，每组10只。FeSO4对照组大鼠，按照100mg·kg-1·d-1灌胃FeSO4混悬液；FeSO4高、中、低剂量组大鼠，分别按照300mg·kg-1·d-1、100mg·kg-1·d-1、50mg·kg-1·d-1灌胃FeSO4混悬液；正常对照组及模型对照组大鼠每天灌胃同体积生理盐水，各组大鼠均在造模后6h开始给药，连续给药2周。
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1.6 症状观察
每天对各组大鼠进行称重，观察体质量变化并记录；观察大鼠粪便形状，记录大鼠发生腹泻、血便的数量。
1.7 结肠黏膜组织损伤评分
各组大鼠给药2周后，3%戊巴比妥钠过量麻醉，腹主动脉取血2ml，离心后置-80℃冰箱保存备用。将肛门以上10cm肠段取出，沿肠系膜纵行切开，用冰生理盐水冲洗，并称量。将黏膜向上展开，观察黏膜损伤并按照Wallace和Keenan1990年的评分标准进行评分：0分为无炎症和溃疡；1分为局部充血但无溃疡；2分为有溃疡但无充血；3分为有1处溃疡及炎症；4分为有2处或2处以上溃疡及炎症；5分为溃疡延伸超过2cm。同时取少量炎症肠组织，迅速放置液氮罐中备用。
1.8 病理组织切片观察
取肛门以上8cm肠段卷起，置10%中性甲醛液中固定，石蜡包埋，行4μm厚连续切片，HE染色观察组织学变化。
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1.9 生化指标测定
血清及结肠组织MDA、SOD均按照检测试剂盒说明书进行操作。
1.10 统计学处理
计量指标以x±s表示，多组间比较行方差分析，各组间两两比较行LSD检验，采用SPSS12.0软件进行统计分析。
2 结 果
2.1 一般状态及大便性状的变化
正常组与FeSO4对照组大鼠活动如常，反应机警，毛发有光泽，饮食正常，体质量增长较多，无腹泻及便血；制模大鼠精神萎靡，毛发无光泽，饮食减少，均出现不同程度的腹泻、便血。正常对照组与FeSO4对照组大鼠体质量增加、腹泻及便血无显著性差异；与正常对照组比较，模型对照组大鼠体质量增加明显减少(P<0.01)；FeSO4中、高剂量组大鼠体质量增加显著, http://www.100md.com(张道权 吴正祥 吴 强 杨 枫 吴正升)