白细胞介素-1受体拮抗剂对大鼠退变椎间盘治疗作用的研究(2)
1.3检测方法1.3.1 免疫组化法测胶原含量
石蜡切片常规脱蜡至水，30%H2O21ml加入蒸馏水10ml，将混合液滴于组织块上，置于室温下10min，蒸馏水冲洗3次，复合修复液修复10min，蒸馏水洗3 次，滴加5%BSA室温封闭20min，甩去多余液体，不洗，滴加浓度为1∶50 兔抗大鼠Ⅱ型胶原单克隆抗体4℃过夜，PBS冲洗后滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃放置20min，滴加SABC置于37℃20min，DAB显色，肉眼观察组织显色为咖啡色时用蒸馏水冲洗，苏木素复染30s后常规脱水、透明、封片。每组随机抽1张作阴性对照，即将一抗换为PBS，余步骤同前。所有免疫组化切片均在同一条件下由熟悉相关知识的非本课题组技术人员使用Simple PCI 图像分析软件对髓核中Ⅱ型胶原的含量进行分析。将灰度值阈值调为0~255，灰度值越高表明胶原的含量越低。灰度值为胶原的相对含量。
1.3.2 蛋白多糖测定 将深低温冰箱中保存的椎间盘组织取出置入离心管中，加入3%NaOH0.5ml置于恒温振荡器中振荡3h ......
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