糖基化终产物对视网膜Mükker细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响(2)
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1.3.1 实验分组
原代兔视网膜Müller细胞达80%融合状态时，予以0.25%胰蛋白酶消化,用含20%胎牛血清的DMEM培养液制成细胞悬液并调整细胞浓度约为1×105个•ml-1，接种于预置有盖玻片的六孔培养板中，置于培养箱中培养，而后分为AGEs-BSA实验组、AGEs-BSA对照组及空白对照组分别干预。根据AGEs-BSA及其对照物浓度(以两者占培养液的体积分数表示)又分别设4%、8%、16%、32%、64%各5个亚组。
1.3.2 bFGF免疫细胞化学(immunocytochemistry，ICC)
分别于1、3、6、9d时取出部分盖玻片，pH7.2～7.6PBS清洗，冰丙酮固定，PBS冲洗，3% H2O2阻断内源性过氧化物酶，PBS冲洗，5%BSA封闭液封闭，甩去不洗；加入兔源抗兔bFGF多克隆抗体，阴性对照加PBS，4℃保湿过夜；PBS冲洗，加入羊抗兔IgG二抗(亲和纯化抗体，标记有生物素)37℃孵育20min；PBS冲洗，加入链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)37℃孵育20min(SABC法) ......
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