1.2 免疫组织化学方法

    采用Envision两步法检测胶质瘤组织MGMT及P53蛋白表达。第一抗体鼠抗MGMT单克隆抗体(克隆号MT3.1,工作浓度1∶100)、鼠抗P53单克隆抗体(克隆号DO-7,工作浓度1∶50),二抗和Envision试剂盒,DAB显色剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。具体操作:连续石蜡标本4μm厚切片;梯度脱蜡水化;3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶活性,室温10min,磷酸盐缓冲液(PBS,pH=7.4)冲洗;2%山羊血清封闭非特异性抗原,室温30min;甩去多余血清后滴加一抗(MGMT、P53),37℃1～2h,PBS冲洗;加二抗IgG,37℃ 30min,PBS冲洗;DAB显色,显微镜下观察显色效果,蒸馏水冲洗终止显色;苏木素复染细胞核,酒精梯度脱水,透明树胶封片。分别设阳性、阴性和空白对照。

    判断标准:MGMT蛋白定位在肿瘤细胞核或胞质内有棕黄色着色颗粒。P53蛋白定位在肿瘤细胞核,呈棕黄色着色颗粒。阳性细胞数>75%为强阳性(+++);阳性细胞在25%～75%为阳性(++);阳性细胞在10%～24%为弱阳性(+),阳性细胞数<10%或无着色为阴性。实验中原有阳性切片作为阳性对照,PBS代替一抗为阴性对照,不加一抗作为空白对照。

    1.3 统计学处理

    采用SPSS 13.0统计软件处理,各组间率的比较采用χ2检验,相关性检验采用Spearman等级相关分析。检验显著性水准取α=0.05,P<0.05为差异有统计学意义 ......